目錄:上海帛科生物技術有限公司>>生化檢測試劑盒>>糖代謝系列>> α葡萄糖苷酶(α GC)測試盒微量法
貨號 | BK-01S6743 |
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產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 檢測方法 | 貨號 |
α葡萄糖苷酶(α GC)測試盒微量法 | 100管/48樣 | 微量法 | BK-01S6743 |
商品介紹:
測定意義: α-GC(EC 3.2.1.20)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中,催化水解芳基或烴基與糖基之間的α-糖苷鍵生成葡萄糖,不僅與細胞壁的松弛或加固有關,而且與細胞識別和一些信號分子產(chǎn)生密切相關。 測定原理: α-GC分解對-硝基苯-α-D吡喃葡萄糖苷生成對-硝基,后者在400nm有最大吸收峰,通過測定吸光值升高速率來計算α-GC活性。 自備用品: 可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。 |
試劑組成和配制:
提取液:液體 100 mL×1 瓶,4℃保存。
試劑一:液體 5 mL×1 瓶,4℃避光保存。
試劑二:液體 15 mL×1 瓶,4℃保存。
試劑三:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。
試劑四:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。
實驗結果判斷我有妙招:
1、定量測定結果根據(jù)標準曲線計算樣品中待測物的含量。
2、以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2~3SD,作為陽性結果的閾值。
3、以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性,P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑,P/N小于1.5為陰性。
4、ELISA試劑盒目測定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照,與陰性對照的顏色接近者,判定為陰性。
與您分享常用不穩(wěn)定試劑的分類及要求:
① 易揮發(fā)、低燃點的試劑要密封,放于陰涼、通風、遠離火源處保存。
② 與水蒸氣,水發(fā)生反應的物質(zhì)要密封,并遠離水源保存。
③ 易與氧氣作用的試劑,應將其固體或晶體密封保存,不宜長期存放其水溶液,亞硫酸,氫硫酸溶液要密封存放,鉀,鈉,白磷更要采用液封形式。
④ 與二氧化碳反應的物質(zhì)要密封保存,其相應的溶液較固體更易反應,所以更要注意密封保存。
⑤ 易揮發(fā)或自身分解的試劑要密封,放于陰涼通風處保存。
操作步驟:
1. 樣品的準備:
a. 細胞樣品的準備:收集細胞,用4 ℃或冰浴預冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預冷組織細胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心,取上清作為待測樣品。
b. 組織樣品的準備:動物用生理鹽水(0.9% NaCl ,含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細胞裂解液比例, 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心,取上清作為待測樣品。
d. 使用BCA蛋白濃度測定試劑盒(P1511)測定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個活力單位左右(不同細胞和組織的差異會比較大,該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測。
e. 根據(jù)蛋白濃度和預計的蛋白使用量,用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液適當稀釋樣品。例如,小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準備好的樣品如果當天測定,可以冰浴保存;如果當天不能完成測定,可以-70 ℃凍存,但建議盡量當天完成測定。
2. 試劑盒的準備工作:
a. WST-8酶工作液的配制: 參照下表,根據(jù)待檢測樣品(包括標準品) 數(shù)量,配制適量WST-8酶工作液,配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存,可當天使用,但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
注意:由于酶溶液的用量較少且易沉降,必須注意在使用前先輕輕離心一下,然后適當混勻后再使用。
b. 反應啟動工作液配制:將試劑盒提供的反應啟動液 (40X) 溶解后混勻,按1μl 反應啟動液(40X) 加入39μl SOD 檢測緩沖液的比例進行稀釋,即為反應啟動工作液。4℃或冰浴保存,可當天使用,但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
c. (可選做) SOD 標準品準備:需自備SOD標準品,用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標準品稀釋至如下系列濃度:20U/ml,10U/ml ,5U/ml,2.5U/ml,1.25U/ml,0.625U/ml。在隨后的檢測中可以各取20微升,參考樣品進行檢測。說明:為避免稀釋后SOD酶活性的下降, SOD標準品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用;本試劑盒對于SOD的檢測并不需要SOD作為標準品,但可以使用SOD標準品作為陽性對照或作為對SOD活性定量的參考。
Hanks氏病毒保存液(pH7.4-7.6) 3ml*36支/盒
10mg 中性蛋白 Neutral Protease 4℃保存
250mL Sodium Carbonate Bicarbonate,0.5M,pH8.5 Sodium Carbonate Bicarbonate,0.5M,pH8.5 常溫保存
1 管 TG1大腸桿菌 TG1 E.coli Strain -80℃保存
2 ug pSecTag B pSecTag B 低溫運輸,-20℃保存
5次 大提柱式藻類RNAout
2 ug pCGPV pCGPV 低溫運輸,-20℃保存
MR-VP生化鑒定管 20支
250mg 新生 Novobiocin Sodium Salt 4℃保存
50T 病毒基因分型PCR檢測試劑盒 低溫運輸,-20℃保存
100 mg MEQ,(6-甲氧-N-乙基) Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存
α葡萄糖苷酶(α GC)測試盒微量法SENP1 小泛素相關修飾蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml
NCoR1 核受體輔助抑制因子1抗體 規(guī)格: 0.1ml
TIAF1 TGFB1誘導抗凋亡因子1抗體 規(guī)格: 0.2ml
phospho-RAD9(Ser328) 磷酸化細胞周期檢查控制蛋白質(zhì)抗體 規(guī)格: 0.1ml
Rabbit Anti-chicken IgG/PE-Cy3 PE-Cy3標記的兔抗雞IgG 規(guī)格: 0.1ml
SUMO 1 類泛素蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
MAGED1 黑色素瘤相關抗原D1抗體 規(guī)格: 0.2ml
Rabbit Anti-human sIgA/Cy5 Cy5標記的兔抗人分泌型IgA 規(guī)格: 0.1ml
PCDHGC4 原鈣粘蛋白γC4抗體 規(guī)格: 0.2ml
CD138/Syndecan 1 多配體蛋白聚糖1抗體 規(guī)格: 0.1ml
Rabbit Anti-human IgM/APC APC標記的兔抗人IgM 規(guī)格: 0.1ml
phospho-TPH(Ser260) 磷酸化色羥化抗體 規(guī)格: 0.1ml