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Ex (nm)	495	Em (nm)	516
分子量	1046.93	溶劑	DMSO
儲(chǔ)存條件	在零下15度以下保存, 避免光照

鈣離子熒光探針 Fluo-8, AM是美國(guó)AAT Bioquest生產(chǎn)的用于鈣通量測(cè)定的試劑，鈣測(cè)量對(duì)于許多生物學(xué)研究至關(guān)重要。結(jié)合 Ca2+ 時(shí)表現(xiàn)出光譜響應(yīng)的熒光探針使研究人員能夠通過使用熒光顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、熒光光譜和熒光酶標(biāo)儀來研究細(xì)胞內(nèi)游離 Ca2+ 濃度的變化。 Fluo-3 AM 和 Fluo-4 AM 是用于活細(xì)胞鈣成像的可見光可激發(fā)鈣指示劑中常用的一種。然而，F(xiàn)luo-3 AM 和 Fluo-4 AM 在酯酶水解后在活細(xì)胞中僅具有中等熒光，并且需要苛刻的細(xì)胞加載條件以大化其細(xì)胞鈣響應(yīng)。 Fluo-8® 染料旨在改善細(xì)胞負(fù)載和鈣響應(yīng)，同時(shí)保持方便的 Fluo-3 和 Fluo-4 光譜波長(zhǎng) Ex/Em = ～490/～520 nm。 Fluo-8® AM 可在室溫下加入細(xì)胞，而 Fluo-3 AM 和 Fluo-4 AM 需要 37°C 才能裝入細(xì)胞。此外，F(xiàn)luo-8® AM 比 Fluo-4 AM 亮兩倍，比 Fluo-3 AM 亮四倍。 AAT Bioquest 提供了一套具有不同鈣結(jié)合親和力的出色 Fluo-8® 試劑（Fluo-8® Kd = 389 nM；Fluo-8H™ Kd = 232 nM；Fluo-8L™ Kd = 1.86 µM；Fluo-8FF ™ Kd = 10 µM）。百螢生物是AAT Bioquest 的中國(guó)代理商，為您提供優(yōu)質(zhì)鈣離子熒光探針 Fluo-8, AM。

實(shí)驗(yàn)方案

儲(chǔ)備溶液配制

Fluo-8® AM 原液配制

在高質(zhì)量無水 DMSO 中制備 2 至 5 mM Fluo-8® AM 儲(chǔ)備溶液。

工作溶液配制

Fluo-8® AM 工作解決方案
在實(shí)驗(yàn)當(dāng)天，將 Fluo-8® AM 溶解在 DMSO 中或?qū)⒌确值闹甘緞﹥?chǔ)備溶液解凍至室溫。使用 0.04% Pluronic® F-127 在您選擇的緩沖液（例如 Hanks 和 Hepes 緩沖液）中制備 2 至 20 µM 的染料工作溶液。對(duì)于大多數(shù)細(xì)胞系，建議使用終濃度為 4-5 μM 的 Fluo-8® AM。必須根據(jù)經(jīng)驗(yàn)確定細(xì)胞加載所需的確切指示劑濃度。
注意非離子洗滌劑 Pluronic® F-127 有時(shí)用于增加 Fluo-8® AM 的水溶性?？梢詮陌傥炦M(jìn)行購(gòu)買。
注意如果您的細(xì)胞含有有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，則可將丙*舒 (1-2 mM) 添加到染料工作溶液中（孔中的終濃度為 0.5-1 mM）以減少去酯化指示劑的泄漏?？梢詮?百螢購(gòu)買各種 ReadiUse 丙*舒產(chǎn)品，包括水溶性、鈉鹽和穩(wěn)定溶液。

操作步驟

1.在生長(zhǎng)培養(yǎng)基中制備細(xì)胞過夜。
2.第二天，將 1X Fluo-8® AM 工作溶液添加到您的細(xì)胞板中。
注意：如果您的化合物會(huì)干擾血清，請(qǐng)?jiān)诩虞d染料之前用新鮮的 HHBS 緩沖液替換生長(zhǎng)培養(yǎng)基。
3.在 37°C 的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育 30 到 60 分鐘。
注意將染料孵育 2 小時(shí)以上可以提高某些細(xì)胞系的信號(hào)強(qiáng)度。
4.用 HHBS 或您選擇的緩沖液（含有陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白抑制劑，如 1 mM 丙*舒）替換染料工作溶液，以去除任何多余的探針。
5.根據(jù)需要添加刺激物，并使用配備有 FITC 濾光片組的熒光顯微鏡或 FDSS、FLIPR 或 FlexStation的熒光板讀取器在 490/525 nm 截止波長(zhǎng) 515 nm 處檢測(cè)熒光。