樣品實(shí)驗(yàn)方案

簡要概述

1.在生長培養(yǎng)基中制備細(xì)胞
2.使用OxiVision Green過氧化物染色細(xì)胞
3.用測(cè)試化合物處理細(xì)胞
4.用流式細(xì)胞儀FITC通道監(jiān)測(cè)熒光強(qiáng)度（Ex / Em = 490/530 nm）

溶液制備

1.儲(chǔ)備溶液

所有未使用的儲(chǔ)備溶液應(yīng)分成一次性等分試樣，并在制備后儲(chǔ)存在-20°C。 避免反復(fù)凍融循環(huán)。
1. OxiVision 綠色過氧化物傳感器原液：
將100μLDMSO（組分B）加入到OxiVision 綠色過氧化物（組分A）的小瓶中，并充分混合。 注意：1μL重組的OxiVision 綠色過氧化物儲(chǔ)備溶液適用于0.5 mL細(xì)胞。 應(yīng)立即使用原液,避光。

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樣品分析

1.使用OxiVision 綠色過氧化物傳感器儲(chǔ)備溶液在培養(yǎng)基或37°C所需緩沖液中染色細(xì)胞30分鐘，避光。

2.用測(cè)試化合物在培養(yǎng)基或37℃的所需緩沖液中處理細(xì)胞一段所需的時(shí)間。對(duì)于對(duì)照樣品（未處理的細(xì)胞），加入相應(yīng)量的化合物緩沖液。注意：建議在培養(yǎng)基中處理細(xì)胞。然而，如果測(cè)試的化合物對(duì)血清敏感，則可以在前吸出生長培養(yǎng)基和血清因子。在抽吸后，將細(xì)胞重懸于1X Hank鹽溶液和20mM Hepes緩沖液（HHBS）或您選擇的緩沖液中?；蛘?，可以在無血清培養(yǎng)基中處理細(xì)胞。注意：我們用培養(yǎng)基中的100μM過氧化氫在37°C處理Jurkat細(xì)胞90分鐘以誘導(dǎo)過氧化氫。詳細(xì)信息請(qǐng)參見圖1。

3.用測(cè)試化合物在37℃處理細(xì)胞一段所需的時(shí)間。取出處理溶液，然后用OxiVision 綠色過氧化物傳感器儲(chǔ)備液在全培養(yǎng)基或37°C所需的緩沖液中染色細(xì)胞一段所需的時(shí)間。

4.使用流式細(xì)胞儀監(jiān)測(cè)FITC通道（Ex / Em = 490 / 530nm）的熒光強(qiáng)度。