樣品實(shí)驗(yàn)方案

簡要概述

1.準(zhǔn)備D-乳酸脫氫酶工作溶液（50 µL）
2.加入D-乳酸脫氫酶標(biāo)準(zhǔn)品或測(cè)試樣品（50 µL）
3.在室溫下孵育30分鐘-2小時(shí)
4.監(jiān)測(cè)Ex / Em = 540/590 nm（截止= 570nm）的熒光增加

溶液制備

1.儲(chǔ)備溶液

除非另有說明，否則所有未使用的儲(chǔ)備溶液應(yīng)分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲(chǔ)存在-20°C下。 避免重復(fù)凍融循環(huán)。
1.1 NAD儲(chǔ)備溶液（100X）：
將100 µL H2O加入NAD小瓶（組分C）中，制成100X NAD儲(chǔ)備溶液。

1.2 D-LDH標(biāo)準(zhǔn)溶液（100 U / mL）：
將100 µL H2O或1x PBS緩沖液加到D-LDH標(biāo)準(zhǔn)溶液（組分D）的小瓶中，制成100 U / mL D-LDH標(biāo)準(zhǔn)溶液。

2.標(biāo)準(zhǔn)溶液

D-LDH標(biāo)準(zhǔn)
將10 µL 100 U / mL D-LDH標(biāo)準(zhǔn)溶液添加到990 µL 1x PBS緩沖液中，以生成1000 mU / mL D-LDH標(biāo)準(zhǔn)溶液。 取1000 mU / mL D-LDH標(biāo)準(zhǔn)溶液，并在PBS中進(jìn)行1：3連續(xù)稀釋，以得到D-LDH標(biāo)準(zhǔn)溶液（SD7-SDH1）的連續(xù)稀釋液。 注意：稀釋的D-LDH標(biāo)準(zhǔn)溶液不穩(wěn)定，應(yīng)在4小時(shí)內(nèi)使用。

3.工作溶液

3.1 將10 mL測(cè)定緩沖液（組分B）添加到瓶中的酶探針（組分A）中，制成酶探針混合物。 注意：此酶探針混合物足以容納兩個(gè)96孔板。

3.2 將50 µL 100X NAD儲(chǔ)備溶液添加到5 mL酶探針混合物中，并充分混合以制成D-LDH工作溶液。 注意：此D-LDH工作溶液足以用于一個(gè)96孔板。 它不穩(wěn)定-足以進(jìn)行一個(gè)實(shí)驗(yàn)并立即使用。