Amplite 比色法L-乳S脫氫酶LDH檢測(cè)試劑盒是美國(guó)AAT Bioquest生產(chǎn)的用于檢測(cè)乳Suan的試劑盒，乳酸脫氫酶（LDH ）是一種可催化丙酮酸和乳酸的相互轉(zhuǎn)換氧化還原酶。 LDH存在于各種各樣的生物體，包括動(dòng)物和植物的細(xì)胞質(zhì)中。細(xì)胞組織的損傷或紅細(xì)胞溶血后釋放的LDH進(jìn)入血液。因?yàn)長(zhǎng)DH是相當(dāng)穩(wěn)定的酶，它已被廣泛地用于評(píng)價(jià)和組織細(xì)胞毒性的存在。乳S脫氫酶的定量具有廣闊的應(yīng)用范圍。 LDH可在某些病理?xiàng)l件下提高，如癌癥。這種Amplite 乳suan脫氫酶測(cè)定試劑盒提供了用于生物樣品中L-乳s脫氫酶（ L- LDH）基于熒光檢測(cè)的方法，如血清，血漿，尿液，以及細(xì)胞培養(yǎng)物的樣品。吸收信號(hào)可以由吸收酶標(biāo)儀在? 575nm處讀取。有了這個(gè)Amplite L-乳s脫氫酶測(cè)定試劑盒，我們能夠探測(cè)到低至3 mU/mL的L-乳s脫氫酶在100 μL的反應(yīng)體積。百螢生物是AAT Bioquest的中國(guó)代理商，為您提供優(yōu)質(zhì)的Amplite 比色法L-乳S脫氫酶LDH檢測(cè)試劑盒。

實(shí)驗(yàn)方案

96孔板測(cè)定示例

概述a

制備D-乳酸測(cè)定混合物（50μL）

加入D-乳酸標(biāo)準(zhǔn)品或測(cè)試樣品（50μL）

在室溫下孵育30分鐘~2小時(shí)

監(jiān)測(cè)吸光度比率在A575nm / A605nm處增加

注意：在開始實(shí)驗(yàn)之前，在室溫下解凍每個(gè)試劑盒組分的一個(gè)小瓶。

操作方法

1.準(zhǔn)備NAD儲(chǔ)備溶液（100X）：

向NAD小瓶（組分C）中加入100μLH2O，制成100X NAD儲(chǔ)備溶液。

2.準(zhǔn)備D-乳酸儲(chǔ)備液：

將200μLH2 O或1×PBS緩沖液加入到D-乳酸鹽標(biāo)準(zhǔn)品（組分D）的小瓶中以制備100mM D-乳酸鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液。

注意：未使用的D-lacate標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液應(yīng)分成單次使用的等分試樣并儲(chǔ)存在-20℃。

3.準(zhǔn)備D-乳酸標(biāo)準(zhǔn)品（0至1 mM）的連續(xù)稀釋液：

3.1將10μLD-乳酸儲(chǔ)備溶液（來(lái)自步驟2）加入990L 1x PBS緩沖液中以產(chǎn)生1mM D-乳酸鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液。

注意：稀釋的D-乳酸標(biāo)準(zhǔn)溶液不穩(wěn)定，應(yīng)在4小時(shí)內(nèi)使用。

3.2取200μL的1mM D-乳酸標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行1：3連續(xù)稀釋，得到300,100,30,10,3,1和0μM的D-乳酸標(biāo)準(zhǔn)品系列稀釋液。

3.3如說明書中的表1和2中所述，將含有D-乳酸鹽標(biāo)準(zhǔn)品和含D-乳酸鹽的測(cè)試樣品的系列稀釋液加入白色透明底96孔微量培養(yǎng)板中。

4.準(zhǔn)備D-乳酸測(cè)定混合物：

4.1將5 mL測(cè)定緩沖液（組分B）加入一瓶酶混合物（組分A）中。

4.2將50μLNAD儲(chǔ)備液（100X，來(lái)自步驟1）加入組分A（來(lái)自步驟4.1）的瓶中，并且混合均勻。

注意：這種D-乳酸測(cè)定混合物足以用于一個(gè)96孔板。 未使用的D-乳酸測(cè)定混合物應(yīng)分成單次使用的等分試樣并儲(chǔ)存在-20℃。

5.運(yùn)行D-乳酸測(cè)定：

5.1將50μLD-乳酸測(cè)定混合物（來(lái)自步驟4.2）添加到D-乳酸標(biāo)準(zhǔn)品，空白對(duì)照和測(cè)試樣品（參見步驟3.3）的每個(gè)孔中，以使總D-乳酸測(cè)定體積為100μL/孔。

注意：對(duì)于384孔板，每孔加入25μL樣品和25μLD-乳酸測(cè)定混合物。

5.2在室溫下孵育反應(yīng)30分鐘至2小時(shí)，避光。

5.3用A575nm / A605nm的吸光度讀板儀檢測(cè)吸光度比率的增加。