Amplite 熒光法L-抗壞血酸檢測(cè)試劑盒是美國(guó)AAT Bioquest生產(chǎn)的用于檢測(cè)抗壞血酸的試劑盒，L-抗壞血酸是細(xì)胞分裂，生長(zhǎng)和防御中植物和動(dòng)物的關(guān)鍵代謝物?？箟难嵊纱蠖鄶?shù)哺乳動(dòng)物物種的肝臟中的葡萄糖產(chǎn)生。對(duì)于人類(lèi)而言，抗壞血酸必須從食物中獲得才能存活，可能導(dǎo)致死亡?？寡趸瘎┛寡趸瘎┛梢越档突及┌Y和心血管疾病等慢性疾病的風(fēng)險(xiǎn)。在食品工業(yè)中，抗壞血酸及其鈉，鉀和鈣鹽通常用作抗氧化食品添加劑。 AAT Bioquest的Amplite 熒光抗壞血酸檢測(cè)試劑盒提供靈敏的熒光檢測(cè)，用于定量生物樣品中的總抗壞血酸和脫氫抗壞血酸（DHA）與抗壞血酸的比例。它利用將抗壞血酸氧化成DHA的酶反應(yīng)，可以通過(guò)熒光酶標(biāo)儀用Ascorbrite Blue檢測(cè)。該測(cè)定可以檢測(cè)樣品中1uM的總抗壞血酸。百螢生物是AAT Bioquest的中國(guó)代理商，為您提供優(yōu)質(zhì)的Amplite 熒光法L-抗壞血酸檢測(cè)試劑盒。

樣品實(shí)驗(yàn)方案

簡(jiǎn)要概述

1.用稀釋的抗壞血酸標(biāo)準(zhǔn)品（50μL）制備測(cè)試樣品
2.加入等體積的工作溶液（50μL）
3.在室溫下孵育30分鐘至1小時(shí)
4.監(jiān)測(cè)Ex / Em = 340 / 430nm處的熒光強(qiáng)度

溶液配制

1.儲(chǔ)存溶液配制

所有未使用的儲(chǔ)備溶液應(yīng)分成一次性等分試樣，并在制備后儲(chǔ)存在-20°C。 避免反復(fù)凍融循環(huán)。
1.1Ascorbrite Blue原液（200X）：
將50μLDMSO（組分E）加入Ascorbrite Blue（組分A）中以制備200X Ascorbrite Blue原液。

1.2抗壞血酸標(biāo)準(zhǔn)溶液（100 mM）：
將200μLddH2O加入抗壞血酸標(biāo)準(zhǔn)小瓶（組分D）中以制備100mM抗壞血酸標(biāo)準(zhǔn)溶液。

2.標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

2.1抗壞血酸標(biāo)準(zhǔn)溶液
將10μL100mM抗壞血酸加入990μL測(cè)定緩沖液中，得到1000μM抗壞血酸溶液（AA7）。 然后取1000μM抗壞血酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，進(jìn)行1：3連續(xù)稀釋，得到連續(xù)稀釋的抗壞血酸標(biāo)準(zhǔn)品（AA1 - AA6）。 注意：抗壞血酸水溶液不穩(wěn)定，會(huì)氧化成DHA。

3.工作溶液配制

3.1總AA測(cè)定
將5mL測(cè)定緩沖液（組分C）加入一瓶酶混合物（組分B）中。 然后將25uL Ascorbrite Blue原液（200X）加入同一瓶中。 好好混合。

3.2DHA測(cè)定
在合適的容器中，加入5mL含有25uL AscorbriteTM Blue原液（200X）的測(cè)定緩沖液（組分C）。 好好混合。 注意：或者，可以通過(guò)在一個(gè)酶混合瓶（組分B）中加入100μLddH2O制備酶原液，制備50X酶原液，并按比例用于總AA測(cè)定（例如，1mL總AA測(cè)定工作溶液） ，將20μL50X酶原液和5μL200XAscorbrite Blue原液添加到1 mL分析緩沖液中。 注意：溶液及時(shí)使用，避免直接暴露在光線下。