Amplite 熒光法檢測(cè)試劑盒 是美國(guó)AAT Bioquest生產(chǎn)的用于檢測(cè)黃*呤的試劑盒，黃*呤是在大多數(shù)人體組織和液體中發(fā)現(xiàn)的嘌呤堿，氨*堿，IBMX，旁黃*呤，己*可*堿，可*堿，它們可以刺激心率，收縮力，高濃度的心律失常。 因此，檢測(cè)生物樣品中的黃*呤變化對(duì)于疾病診斷和監(jiān)測(cè)是重要的。 Amplite 熒光黃*呤測(cè)定試劑盒為黃*呤的測(cè)量提供了快速且超靈敏的方法。 它可以用方便的96孔或384孔微量滴定板格式進(jìn)行。 黃*呤在黃*呤氧化酶存在下氧化成尿酸以釋放過(guò)氧化氫，其可以通過(guò)熒光酶標(biāo)儀在Ex / Em = 540nm / 590nm下用Amplite Red特別測(cè)量。 使用Amplite 熒光黃*呤測(cè)定試劑盒，在100μL反應(yīng)體積中檢測(cè)到低至0.4μM的黃*呤。百螢生物是AAT Bioquest的中國(guó)代理商，為您提供Amplite 熒光法檢測(cè)試劑盒 。

樣品實(shí)驗(yàn)方案

簡(jiǎn)要概述

1.準(zhǔn)備黃*呤標(biāo)準(zhǔn)品或測(cè)試樣品（50 µL）
2.添加黃*呤工作溶液（50 µL）
3.在室溫下孵育30-60分鐘
4.在Ex / Em = 540/590 nm時(shí)讀取熒光強(qiáng)度

溶液配制

1.儲(chǔ)存溶液配制

所有未使用的儲(chǔ)備溶液應(yīng)分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲(chǔ)存在-20°C下。 避免重復(fù)凍融循環(huán)。
1.1 Amplite Red底物儲(chǔ)備液（250X）：
在Amplite Red底物（組分A）的小瓶中加入40 µL DMSO（組分F）。 注意：Amplite Red底物在硫醇（例如二硫蘇糖醇（DTT）和2-巰*乙醇）的存在下不穩(wěn)定。 反應(yīng)中DTT或2-巰*乙醇的終濃度應(yīng)不高于10 µM。 由于Amplite Red在pH> 8.5時(shí)不穩(wěn)定，因此應(yīng)在pH 7-8（建議pH 7.4）下進(jìn)行測(cè)定。

1.2 HRP儲(chǔ)備溶液（500X）：
將100 µL測(cè)定緩沖液（組分B）加到辣根過(guò)氧化物酶（組分C）小瓶中。

1.3 黃*呤氧化酶（XO）儲(chǔ)備溶液（100X）：
向小瓶黃*呤氧化酶（組分E）中加入100 µL測(cè)定緩沖液（組分B）制成黃*呤氧化酶（XO）儲(chǔ)備液（100X）。

2.標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

黃*呤標(biāo)準(zhǔn)品
將5 µL黃*呤標(biāo)準(zhǔn)品（組分D）添加到995 µL測(cè)定緩沖液（組分B）中，得到100 µM黃*呤標(biāo)準(zhǔn)溶液。 取200 µL 100 µM黃*呤標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行1：3連續(xù)稀釋?zhuān)缘玫竭B續(xù)稀釋的黃*呤標(biāo)準(zhǔn)液（X1-X7）。

3.工作溶液配制

將20μL的Amplite Red底物儲(chǔ)備液（250X），10μL的HRP儲(chǔ)備液（500X）和50μL的黃*呤氧化酶儲(chǔ)備液（100X）加到5 mL的測(cè)定緩沖液（組分B）中，制成總體積 5.08毫升。 注意：避免直接暴露在光線下并立即使用。