酪朊酸,TAMRA標(biāo)記 熒光染料是美國(guó)AAT Bioquest生產(chǎn)的，由于這種本身就具有熒光特征的酪蛋白可以被許多蛋白酶水解，因此它們廣泛地用于熒光測(cè)定法檢測(cè)蛋白酶活性的試驗(yàn)中。作為一個(gè)完整的底物，酪蛋白上帶著TAMRA標(biāo)簽，具有顯著的熒光淬滅效果。具有顯著的熒光淬滅效果。經(jīng)過(guò)蛋白酶催化水解，釋放其淬滅效果，產(chǎn)生明亮的綠色熒光染料所標(biāo)記的短肽；這種熒光強(qiáng)度的增加與蛋白酶的活性成直接的比例關(guān)系。與FITC標(biāo)記的酪蛋白相比，這種酪蛋白底物產(chǎn)生熒光不依賴于pH，這種特性使其能夠更方便地用于需要在低pH條件進(jìn)行的熒光分析。我們不推薦將這種偶聯(lián)物用于熒光偏振分析。在熒光偏振分析中我們可以使用常規(guī)的熒光素標(biāo)記的酪蛋白偶聯(lián)物。百螢生物是AAT Bioquest的中國(guó)代理商，為您提供優(yōu)質(zhì)的酪朊酸,TAMRA標(biāo)記 熒光染料。

樣品實(shí)驗(yàn)方案

溶液制備

1.儲(chǔ)備溶液

所有未使用的儲(chǔ)備溶液應(yīng)分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲(chǔ)存在-20°C下。 避免重復(fù)凍融循環(huán)。
酪蛋白，TAMRA共軛原液：
在PBS緩沖液中制成5-10 mg / mL酪蛋白，TAMRA偶聯(lián)的原液。 注意：未使用的儲(chǔ)備溶液可分為一次性使用的等分試樣，并在-20 oC下保存，并避免暴露在光線下。

2.工作溶液

酪蛋白TAMRA共軛的工作溶液（2X）：
將TAMRA共軛的原液以100-400μg/ mL的濃度稀釋至50-100 mM Tris緩沖液（pH 7.4）中。 2X Assay工作溶液設(shè)計(jì)用于檢測(cè)胰*乳蛋白酶，胰*白酶，嗜熱菌蛋白酶，蛋白酶K，蛋白酶XIV和人白細(xì)胞彈性蛋白酶的活性。 對(duì)于其他蛋白酶，請(qǐng)參考表1中合適的測(cè)定緩沖液配方。 對(duì)于每種蛋白酶，應(yīng)通過(guò)實(shí)驗(yàn)確定測(cè)定工作溶液的佳濃度。

樣品操作及分析

1.將等體積的胰*白酶標(biāo)準(zhǔn)品或樣品與2X Assay工作溶液混合。

2.在Ex / Em = 490/525 nm處監(jiān)控?zé)晒獾脑黾印?/span>

2.1 對(duì)于動(dòng)力學(xué)讀數(shù)：立即開始連續(xù)連續(xù)測(cè)量熒光強(qiáng)度，并每5分鐘記錄一次數(shù)據(jù)，持續(xù)30分鐘。

2.2 對(duì)于終點(diǎn)讀數(shù)：在避光的條件下，將反應(yīng)在所需溫度下孵育30至60分鐘。 然后測(cè)量熒光強(qiáng)度。