樣品實驗方案

簡要概述

1. 準備細胞

2. 添加測試化合物

3. 添加MitoLite NIR工作溶液（100 µL /孔/ 96孔板或25 µL /孔/ 384孔板）

4. 在5％CO2的培養(yǎng)箱中于37°C孵育30-60分鐘

5. 添加測定緩沖液B（50 µL /孔/ 96孔板或12.5 µL /孔/ 384孔板）

6. 檢測Ex / Em = 640/680 nm（截止= 665 nm）的熒光強度（底部讀取模式）

溶液配制

工作溶液配制

將50 µL的200X MitoLite NIR（組分A）添加到10 mL的測定緩沖液A（組分B）中，并充分混合以制成MitoLite NIR工作溶液，避光。

操作步驟

1.用測試化合物處理細胞一段所需的時間，以誘導細胞凋亡并建立平行對照實驗。

陰性對照：僅用載體處理細胞。

陽性對照：在37℃，5％CO2培養(yǎng)箱中，以5-50 µM的濃度用FCCP或CCCP處理細胞15至30分鐘。 注意：CCCP或FCCP可以與MitoLite NIR同時添加。 為了獲得結果，可能需要為每個單獨的細胞系滴定CCCP或FCCP。

2.在添加MitoLite NIR工作溶液之前，請去除細胞培養(yǎng)基。注意：在添加MitoLite NIR工作溶液之前，必須除去細胞培養(yǎng)基。

3.將100 µL /孔/ 96孔板或25 µL /孔/ 384孔板的MitoLite NIR工作溶液添加到細胞板中。

4.在37°C，5％CO2的培養(yǎng)箱中避光放置30-60分鐘。注意：適當的孵育時間取決于所用的單個細胞類型和細胞濃度。優(yōu)化每個實驗的孵育時間。

5.在檢測熒光信號之前，將50 µL /孔/ 96孔板或12.5 µL /孔/ 384孔板的測定緩沖液B（組分C）加入細胞板。注意：加載后請勿洗滌細胞。對于非貼壁細胞，建議在加入測定緩沖液B（組分C）后，以800 rpm離心細胞板2分鐘，然后制動。

6.加入測定緩沖液B（組分）10到30分鐘后，使用熒光酶標儀（底部讀取模式）（Ex / Em = 640/680 nm（Cutoff = 665 nm））檢測熒光強度。