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Ex?(nm)	415	Em?(nm)	499

Cell Meter 細(xì)胞內(nèi)GSH檢測試劑盒 是一種具有多種參數(shù)可監(jiān)測細(xì)胞凋亡的試劑盒。該試劑盒通過測量還原型*（GSH）的減少來檢測細(xì)胞凋亡。GSH對于維持細(xì)胞的氧化還原水平很重要，它參與許多細(xì)胞過程，包括清除自由基，藥物解毒，細(xì)胞信號傳導(dǎo)和細(xì)胞增殖等。細(xì)胞中GSH濃度的降低是許多細(xì)胞死亡的早期標(biāo)志。我們的GSH檢測試劑盒使用我們專有的ThiolTrace Violet500，當(dāng)與硫醇（包括細(xì)胞中的GSH）反應(yīng)時，它會發(fā)出強(qiáng)烈的熒光。在正常細(xì)胞中，該探針是高度熒光的，而在凋亡細(xì)胞中，染色強(qiáng)度會大幅度降低。用ThiolTrace Violet染色的細(xì)胞可以用流式細(xì)胞儀（Pacific Orange 濾光片組）觀察。該試劑盒可與其他試劑（例如7-AAD（＃17501）一起使用，用于細(xì)胞活力和凋亡的多參數(shù)研究。該試劑盒經(jīng)過優(yōu)化，可通過流式細(xì)胞儀篩選凋亡激活劑和抑制劑。Cell Meter 細(xì)胞內(nèi)GSH檢測試劑盒 。

實(shí)驗(yàn)方案

簡要概述

用5×105到1×106細(xì)胞/ mL 的密度制備含測試化合物的細(xì)胞

準(zhǔn)備ThiolTrace Violet 500工作溶液并將其添加到細(xì)胞中

在37℃孵育20至30分鐘

在Ex / Em = 405/525 nm處讀取熒光強(qiáng)度（Pacific Orange濾光片組）

溶液配制

儲備溶液配制

ThiolTrace Violet 500儲備液（500X）：
在ThiolTrace Violet 500 的小瓶中加入200 µL DMSO（組分C）。注意：分裝并在-20℃儲存未使用的ThiolTrace Violet 500，避免反復(fù)冷凍/解凍循環(huán)。

工作溶液配制

ThiolTrace Violet 500工作溶液（1X）：
將2 µL ThiolTrace Violet 500儲備溶液添加到1 mL的測定緩沖液（組分B）或您自備的緩沖液中，并充分混合。注意：ThiolTrace Violet 500 工作溶液可以在含有血清的細(xì)胞培養(yǎng)基中制備。

操作步驟

對于貼壁細(xì)胞，用0.5 mM EDTA輕輕提起細(xì)胞以保持細(xì)胞完整，在使用ThiolTrace Violet 500工作溶液孵育之前，用含血清的培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞一次。注意：孵育時間取決于所用的細(xì)胞類型和細(xì)胞濃度。
將細(xì)胞以1000 rpm的速度離心4分鐘，然后用1 mL緩沖液（可選）洗滌細(xì)胞。
將細(xì)胞重懸于1 mL ThiolTrace Violet 500工作溶液中，并在37℃的培養(yǎng)箱中孵育20至30分鐘。
使用Pacific Orange濾光片組（Ex / Em = 405/525 nm），用流式細(xì)胞儀檢測熒光強(qiáng)度。