操作步驟

1.根據需要準備細胞。例如，將貼壁細胞在生長培養(yǎng)基中以40,000至80,000細胞/孔/100μL過夜  

對于384孔板，96孔或10,000至20,000個細胞/孔/25μL。

注意：應對每個細胞系進行單獨評估，以確定佳細胞密度。

2.準備RatioWorks Protonex 綠色葡聚糖裝載解決方案：

2.1在1 mL 無菌水或Hanks和20 mM Hepes緩沖液（HHBS）中制備1mg / mL Protonex 綠色葡聚糖原液。應立即使用原液。任何未使用的溶液需要等分并在< -20 o C重新冷凍。

注意：避免反復凍融循環(huán)，避免光照。

2.2在HHBS中制備20-100ug / mL Protonex 綠色葡聚糖加載溶液。

3.運行內吞作用測定

3.1取出培養(yǎng)基，將100μL/孔（96孔板）或25μL /孔（384孔板） Protonex Green Dextran 上樣溶液加入細胞板（步驟2.2）。

注1：如果您的化合物干擾血清，重要的是用HHBS緩沖液替換生長培養(yǎng)基（96孔板100μL/孔或染料加載前384孔板25μL/ 孔）。

注2： Protonex 綠色葡聚糖從早期內體快速運輸到晚期內體，隨后可能與溶酶體融合。為了幫助在內體中可視化Protonex 綠色葡聚糖，我們建議增加標記濃度并減少加載時間，并立即成像。

3.2將染料加載板在細胞培養(yǎng)箱中孵育5至20分鐘。

3.3用HHBS或生長培養(yǎng)基清洗并更換染料加載溶液。

3.4通過監(jiān)測Ex / Em = 443/505 nm處的熒光來進行胞吞作用測定。