人血清白蛋白（HSA）是人血漿中酸性藥物的重要載體之一，并且可逆地結(jié)合大量不同的化合物。已為HSA確定了幾個不同的配體結(jié)合位點。其中，Site I被確定為主要的藥物結(jié)合位點之一。人血清白蛋白（HSA）I位結(jié)合檢測試劑盒是一種基于熒光的高通量測定法，用于確定小分子與HSA的結(jié)合。該測定法基于新型熒光探針HSA Blue™S1。它的特征是具有特別的光譜和結(jié)合特性，可與HSA的位點1結(jié)合。HSA Blue™S1在蛋白質(zhì)結(jié)合狀態(tài)和蛋白質(zhì)未結(jié)合狀態(tài)之間顯示出較大的熒光強度差異。在HSA Blue™S1存在下，小分子競爭HSA結(jié)合會導(dǎo)致熒光強度低。該測定法可用作高通量篩選工具，以確定在站點I處與HSA的總結(jié)合。百螢生物為您提供優(yōu)質(zhì)的人血清白蛋白（HSA）I位結(jié)合檢測試劑盒。

樣品分析方案

概述

在微孔板孔中制備樣品

從樣品中取出液體

添加鬼筆環(huán)肽-iFluor 488標(biāo)記溶液（100μL/孔）

在室溫下染色細(xì)胞20至90分鐘

清洗細(xì)胞在顯微鏡下觀察樣品

注意：將小瓶加熱至室溫并在打開前短暫離心。

儲備溶液配制

將100 µL DMSO（組分D）加入HSA Blue™S1（組分A）中并充分混合。
注意：將未使用的HSA Blue™S1儲備溶液分裝成一小份保存在-20°C下，以避免凍融循環(huán)。

工作溶液配制

將50 µL HSA Blue™S1儲備溶液加入5 mL HSA分析緩沖液（組分B）中，并充分混合。
注意：HSA Blue™S1工作溶液不應(yīng)儲存，應(yīng)立即使用。
注意：5 mL HSA Blue™S1工作溶液足以用于一個96孔板。

將250 µL HSA溶液（組分C）加入5 mL HSA分析緩沖液（組分B）中并充分混合。
注意：5 mL HSA工作溶液足以用于一個96孔板。

使用HSA分析緩沖液（組分B）將藥物原液在3X工作溶液中稀釋至所需濃度。
注意：對于此處提到的方案，每孔的建議體積為50 µL。

操作步驟

以下方案可用作參考，實際應(yīng)根據(jù)需要進行調(diào)整。

1. 在孔中加入50 µL HSA Blue™S1工作溶液。

2. 在孔中加入50 µL HSA工作溶液。

3. 在各自的孔中加入50 µL藥物工作溶液。（總體積= 150 µL /孔）。

4. 將樣品在室溫下孵育30分鐘。

5. 使用熒光酶標(biāo)儀在Ex / Em = 365/480 nm（截止= 435 nm）處檢測熒光的增加。