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Pierce™ 直接 IP 試劑盒

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更新時(shí)間：2023-08-07 21:28:04瀏覽次數(shù)：107次

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Pierce™ 直接 IP 試劑盒

詳細(xì)介紹

Thermo Scientific Pierce 直接 IP 試劑盒使用活化樹(shù)脂以共價(jià)方式將 IP 抗體（任何物種或類別）固定至瓊脂糖微珠，無(wú)需使用蛋白 A/G，從而在無(wú)抗體干擾的情況下實(shí)現(xiàn)免疫沉淀。

該方法的主要優(yōu)勢(shì)是有機(jī)會(huì)使用任何物種或亞類的純化抗體（而不僅僅是與蛋白 A 或 G 結(jié)合的類型）和能夠在不受抗體污染的情況下純化靶蛋白。使用該方法，還可從血清樣品中免疫沉淀抗原，而不會(huì)共純化非靶向免疫球蛋白。最后，該試劑盒使用微量離心杯從微珠狀瓊脂糖樹(shù)脂中有效清洗和分離樣品。

直接 IP 試劑盒的特點(diǎn)：

?僅需少于 10 µg 抗體 — 經(jīng)優(yōu)化的程序進(jìn)行單一 IP 實(shí)驗(yàn)時(shí)僅需 2 至 10 µg 抗體，不多于傳統(tǒng) IP 方法需要的抗體量
? 簡(jiǎn)單高效的可擴(kuò)展性 — 僅使用單一免疫沉淀實(shí)驗(yàn)所需的抗體量或固定 100 至 200 µg 抗體即可制備即用型 IP 親和樹(shù)脂用于許多實(shí)驗(yàn)
? 極低抗體污染 — 將抗體不可逆地連接至瓊脂糖微珠，從而盡可能減少重鏈和輕鏈與純化蛋白共洗脫（即，低于 5%）
? 使用任何物種和亞類的抗體進(jìn)行 IP — 使用雞 IgY、人 IgE、小鼠 IgM 或任何其他純化蛋白
? 制備的抗體親和樹(shù)脂可重復(fù)使用 — 抗體以共價(jià)方式固定化，且不會(huì)被溫和洗脫程序滅活，因此樹(shù)脂通?？芍貜?fù)使用數(shù)次
? 便利的樣品處理 — 離心柱（參見(jiàn)尺寸）可消除樹(shù)脂損耗并可高效分離溶液
? 全套試劑盒 — 包裝包括細(xì)胞裂解緩沖液和足以進(jìn)行至少 50 次抗體固定和 IP 實(shí)驗(yàn)的試劑和離心柱
? 需要純化抗體 — IP 抗體溶液必須不含 BSA、明膠或其他穩(wěn)定劑蛋白；如需輕松去除這些蛋白，請(qǐng)參見(jiàn)我們的抗體純化試劑盒（產(chǎn)品編號(hào) 44600）

應(yīng)用：
?隨后通過(guò)電泳和蛋白切除進(jìn)行質(zhì)譜或測(cè)序鑒定分析的免疫沉淀；
?對(duì)分子量與重鏈或輕鏈抗體片段相似的靶蛋白進(jìn)行的免疫沉淀和 SDS-PAGE 分析
?對(duì)通過(guò)非變性方法（即，不涉及 SDS-PAGE 的方法）進(jìn)行后續(xù)分析的靶蛋白進(jìn)行的免疫沉淀
?使用未結(jié)合至蛋白 A、蛋白 G 或蛋白 A/G 進(jìn)行的免疫沉淀
?從血清或含免疫球蛋白的其他樣品中進(jìn)行的免疫沉淀

通過(guò)兩個(gè)簡(jiǎn)單步驟進(jìn)行直接免疫沉淀：

步驟 1：將抗體連接至瓊脂糖樹(shù)脂：直接 IP 方法的步是制備 IP 抗體親和樹(shù)脂。在含適當(dāng)體積 AminoLink Plus 偶聯(lián)樹(shù)脂（醛活化微珠狀瓊脂糖樹(shù)脂）的磷酸鹽緩沖液中孵育純抗體（參見(jiàn)產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)）。在孵育過(guò)程中，大抗體分子表面上的各種賴氨酸 ε 胺與樹(shù)脂上的醛基團(tuán)發(fā)生反應(yīng)，從而形成席夫堿鍵，然后在存在氰基氫化物的情況下穩(wěn)定為仲胺鍵。固定化反應(yīng)（被稱為還原胺化）是一種非變性反應(yīng)，產(chǎn)生的抗體偶聯(lián)效率通常高于 85%，且抗原結(jié)合功能損失極小。

步驟 2：進(jìn)行免疫沉淀實(shí)驗(yàn)：制備后，抗體樹(shù)脂可以多份平行等份試液或整體形式進(jìn)行 IP 實(shí)驗(yàn)。將抗體樹(shù)脂與含有目標(biāo)蛋白抗原的樣品一起孵育，可使抗體:抗原復(fù)合物形成。進(jìn)行洗滌以去除樣品中的非結(jié)合（可能不需要）組分后，通過(guò)使用試劑盒中提供的洗脫緩沖液從抗體中解離來(lái)回收抗原。在微量離心杯中完成整個(gè)程序，使得短暫離心后溶液與瓊脂糖樹(shù)脂分離。只有通過(guò)該程序?qū)乖M(jìn)行洗脫，才能在不受抗體片段干擾的情況下識(shí)別和進(jìn)一步分析抗原。此外，抗體樹(shù)脂可以重復(fù)使用，用于其他輪次的免疫沉淀。

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