| 檢測范圍：7.8 ng/ml-500 ng/ml zui低檢測限：1.95 ng/ml 特異性：本試劑盒可用于快速檢測*。有一定交叉反應(yīng)。 交叉反應(yīng)： ** *150% ** 沙拉沙星130% *86% 有效期：6個月 預(yù)期應(yīng)用：ELISA法定量測定牛奶、牛肉、豬肉、羊肉、雞、火雞、魚和蝦中的*殘留量。 說明 1．試劑盒保存：-20℃(較長時間不用時)；2-8℃(頻繁使用時)。 2．濃洗滌液低溫保存會有鹽析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶。 3．中、英文說明書可能會有不*之處，請以英文說明書為準。 4．剛開啟的酶聯(lián)板孔中可能會含有少許水樣物質(zhì)，此為正常現(xiàn)象，不會對實驗結(jié)果造成任何影響。 概述 回旋酶抑制劑分為四種亞群，*(代謝產(chǎn)物：*)和達氟沙星屬于氟奎諾酮，是允許使用的獸用藥物。氟奎諾酮是廣譜抗菌素，廣泛應(yīng)用養(yǎng)殖業(yè)，特別是牛、豬和雞。在過去的幾年里，氟奎諾酮的使用有所增加，大量的奎諾酮類藥物被用于預(yù)防傳染病，特別是在雞、豬和魚/蝦養(yǎng)殖廠。 實驗原理 本試劑盒采用免疫競爭法檢測*。微孔板上包被有抗*抗體。加入*酶結(jié)合物和*標準品或樣品，游離*與*結(jié)合物競爭微量反應(yīng)板上的抗*抗體，沒有結(jié)合的酶結(jié)合物被洗去。再向反應(yīng)孔中加入相應(yīng)反應(yīng)底物TMB，作用一定時間后，結(jié)合的酶結(jié)合物將TMB轉(zhuǎn)化為藍色，轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的*呈負相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)，計算樣品濃度。 試劑盒組成及試劑配制 1. 已包被兔抗三聚氰胺抗體的酶聯(lián)板(Assay plate )：一塊(96孔)。 2. 標準品(Standard)：2×100ul/瓶。 3. 樣品稀釋液(Sample Diluent)：1×20ml/瓶。 4. 辣根過氧化物酶標記*結(jié)合物(HRP - CPFX)：1×100ul/瓶(1：100)。 5. 辣根過氧化物酶標記*結(jié)合物稀釋液(HRP –CPFX Diluent)：1×10ml/瓶。 6. 底物溶液(TMB Substrate)：1×10ml/瓶。 7. 濃洗滌液(Wash Buffer)：1×20ml/瓶，使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。 8. 終止液(Stop Solution)：1×10ml/瓶(2N H2SO4)。 需要的試劑和器材 1. 標準規(guī)格酶標儀 2. 高速離心機 3. 電熱恒溫培養(yǎng)箱 4. 超聲清洗器 5. 離子交換小柱(PCX) 6. 氮氣吹干儀 7. 干凈的試管和Eppendof管 8. 系列可調(diào)節(jié)移液器及吸頭，一次檢測樣品較多時，用多通道移液器 9. 蒸餾水，容量瓶等 樣品制備： 牛奶不需要處理；肉、魚、蝦等需均質(zhì)、提取、離心、稀釋。 標本的稀釋原則： 首先通過文獻檢索的方式了解待測樣本的大致含量，確定適當?shù)南♂尡稊?shù)。只有稀釋至標準曲線的范圍內(nèi)，檢測的結(jié)果才是準確的。稀釋的過程中，應(yīng)做好詳細的記錄。zui后計算濃度時，稀釋了“N”倍，標本的濃度應(yīng)再乘以“N”。 標準品的稀釋原則：2瓶，每瓶濃度為500 ng/ml，以樣品稀釋液做系列倍比稀釋，分別稀釋500 ng/ml，250 ng/ml， 125 ng/ml，62.5 ng/ml，31.2 ng/ml，15.6 ng/ml，7.8 ng/ml。樣品稀釋液直接作為標準濃度0 ng/ml。 辣根過氧化物酶標記*結(jié)合物的稀釋原則： 臨用前以辣根過氧化物酶標記*結(jié)合物稀釋液稀釋，稀釋前根據(jù)預(yù)先計算好的每次實驗所需的總量配制(每孔50ul)，實際配制時應(yīng)多配制0.1-0.2ml。如10ul辣根過氧化物酶標記*結(jié)合物加990ul辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液 的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內(nèi)配制。 操作步驟 實驗開始前，請?zhí)崆芭渲煤盟性噭?，試劑或樣品稀釋時，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。每次檢測都應(yīng)該做標準曲線。如樣品濃度過高時，用樣品稀釋液進行稀釋，以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。 1. 加樣：分別設(shè)空白孔、標準孔、待測樣品孔?？瞻卓准訕悠废♂屢?00ul，余孔分別加標準品或待測樣品100ul，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標板孔底部，然后在所有孔中加入50 ul辣根過氧化物酶標記*結(jié)合物工作液。盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。酶標板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)30分鐘-1小時。為保證實驗結(jié)果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。 2. 溫育后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350ul/每孔，甩干。 3. 依序每孔加底物溶液90ul，37℃避光顯色(30分鐘內(nèi)，此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度藍色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止)。 4. 依序每孔加終止溶液50ul，終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結(jié)果的準確性，底物反應(yīng)時間到后應(yīng)盡快加入終止液。 5. 用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。 在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行檢測。 注： 1. 用戶在初次使用試劑盒時，應(yīng)將各種試劑管離心數(shù)分鐘，以便試劑集中到管底。 2. 每次實驗留一孔作為空白調(diào)零孔，該孔不加任何試劑，只是zui后加底物溶液及2N H2SO4。測量時先用此孔調(diào)OD值至零。 3. 為防止樣品蒸發(fā)，試驗時將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標板加上蓋或覆膜。 4. 未使用完的酶標板或者試劑，請于2-8℃保存。標準品、辣根過氧化物酶標記*結(jié)合物工作液請依據(jù)所需的量配置使用。請勿重復(fù)使用已稀釋過的標準品、辣根過氧化物酶標記*結(jié)合物工作液。 5. 建議檢測樣品時均設(shè)雙孔測定，以保證檢測結(jié)果的準確性。 洗板方法
手工洗板方法：吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標板內(nèi)的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標板朝下用力拍幾次；將*的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內(nèi)，浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要，重復(fù)此過程數(shù)次。
自動洗板：如果有自動洗板機，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實驗過程中。 計算 以標準物的濃度為橫坐標(對數(shù)坐標)，OD值為縱坐標(普通坐標)，在半對數(shù)坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。 注意事項 1. 當混合蛋白溶液時應(yīng)盡量輕緩，避免起泡。 2. 洗滌過程非常重要，不充分的洗滌易造成假陽性。 3. 一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，*使用排槍加樣。 4. 請每次測定的同時做標準曲線，做復(fù)孔。 5. 如標本中待測物質(zhì)含量過高，請先稀釋后再測定，計算時請zui后乘以稀釋倍數(shù)。 6. 在配制標準品、檢測溶液工作液時，請以相應(yīng)的稀釋液配制，不能混淆。 7. 底物請避光保存。 8. 不要用其它生產(chǎn)廠家的試劑替換試劑盒中的試劑。 9. 本產(chǎn)品適用于大量樣本的快速篩查。由于生物試驗存在人為及不可預(yù)知的影響因素，本試劑盒得到的檢測結(jié)果僅為參考，不能據(jù)此做出任何結(jié)論。 | 
