【預期用途】
本試劑盒用于檢測豬血清中豬藍耳病毒抗體。評估豬場豬藍耳苗免疫狀況，感染豬的血清學診斷。
【原 理】
本試劑盒系由預包被豬藍耳病毒（PRRSV）GP5+GP6重組蛋白的微孔板和酶標記二抗及其他配套試劑組成，應用酶聯(lián)免疫法（ELISA）原理檢測豬血清或血漿中豬藍耳病毒特異性抗體。實驗時，在包被板中加入對照血清和稀釋的待檢血清，經(jīng)溫育后，若樣品中含有豬藍耳病毒的特異性抗體，則將與包被板上抗原結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后；再加入酶標二抗，與包被板上抗原抗體復合物發(fā)生特異性結(jié)合；再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶結(jié)合物，在孔中加TMB底物液，與酶反應形成藍色產(chǎn)物，顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關(guān)；加入終止液終止反應后，產(chǎn)物變?yōu)辄S色；用酶標儀在450nm波長測定各反應孔中的吸光值，即可知樣品是否含有特異性抗體。
【試劑盒組成】
| 1. | 豬藍耳病毒抗原預包被微孔板條 | 96T×1 |
| 2. | 酶標記物 （紅蓋） | 11ml×1 |
| 3. | 樣品稀釋液 （黃蓋） | 25ml×1 |
| 4. | 20X濃縮洗滌液 （透明蓋） | 20ml×1 |
| 5. | 底物液A （白蓋） | 6ml×1 |
| 6. | 底物液B （黑蓋） | 6ml×1 |
| 7. | 終止液 （黃蓋） | 6ml×1 |
| 8. | 陽性對照 （紅蓋，已滅活） | 0.5ml×1 |
| 9. | 陰性對照 （綠蓋，已滅活） | 0.5ml×1 |
| 10. | 蓋板膜 | 1張 |
| 11. | 自封袋 | 1個 |
| 12. | 說明書 | 1份 |
【樣品制備】 取動物全血，按常規(guī)方法制備血清，要求血清清亮，無溶血、無污染。樣品短期可于2～8℃保存，*需置-20℃保存。
【樣品稀釋】 用樣品稀釋液將待檢血清按40倍稀釋（如5μl血清加入195μl樣品稀釋液中，混勻）。陰、陽性對照不用稀釋。
【洗滌液配制】濃縮洗滌液使用前應恢復至室溫（25℃左右），并搖動使沉淀的鹽溶解，然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋。
【試驗操作方法】
1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘，恢復至室溫。
2.取所需用量包被微孔板條，設空白、陰性及陽性對照各2孔，未用的板條盡快密封，2～8℃保存。
3.陰性、陽性對照孔分別加入陰性、陽性對照血清100μl；樣品孔每孔加入稀釋后的血清樣本100μl；空白對照孔不加。
4.混勻，置37℃反應30分鐘。
5.扣去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，重復洗滌5次，拍干。
6.每孔加酶標記物100μl（空白孔除外）。置37℃反應30分鐘。
7.洗滌，同步驟5。
8.每孔依次加顯色劑A、顯色劑B各50μl，混勻，37℃避光反應10分鐘。
9.每孔加終止液50μl，混勻，用空白孔調(diào)零，于450nm（630nm作參比波長）測定各孔吸光值（A450）。
【結(jié)果判定】
定義：N=陰性對照孔平均A值；P=陽性對照孔平均A值；S=樣品孔A值；S/P=樣品孔A值/陽性對照孔平均A值。
1.正常情況下，N≤0.10，P≥0.50。
2.S/P≥0.18時判為陽性，S/P＜0.15時判為陰性，0.15≤S/P＜0.18時判為可疑。
當本實驗結(jié)果為陰性時表明豬只抗體水平不足，建議補打相應疫苗。
【試驗方法的局限性】
該試驗僅作為定性檢測豬藍耳病毒IgG抗體，不能區(qū)別疫苗免疫和野毒感染。
【注意事項】
1.實驗操作時需戴手套、穿工作衣，嚴格健全和執(zhí)行消毒隔離制度，各種實驗廢棄物都應按傳染物處理。
2.終止液具有腐蝕性，應避免接觸皮膚和衣物，如不慎接觸請立即用大量自來水沖洗。
3.微孔板從冷藏環(huán)境中取出時應恢復至室溫方可開袋，未用完的微孔板需放入有干燥劑的密封袋中保存（包被板開封后請于2～8℃避光保存，使用期限為1個月）。
4.濃縮洗滌液在低溫時容易結(jié)晶，使用時需恢復至室溫以*溶解。
5.洗滌時各孔均需加滿液體，防止孔口有游離酶不能洗凈。
6.用于檢測的樣品應保持新鮮。
7.試驗結(jié)果的判定必須以酶標儀讀數(shù)為準。
8.不同批號試劑組分不得混用。
【儲 存】
原包裝應儲存于2～8℃保鮮冷藏，切勿冷凍。
【有效期】
有效期12個月;生產(chǎn)日期、有效期、生產(chǎn)批號見外包裝。
