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呋喃它酮代謝物快速檢測(cè)試劑盒

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蘇州艾瑞德生物科技有限公司

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

詳細(xì)介紹

【產(chǎn)品簡(jiǎn)介】

硝基呋喃類(lèi)藥物因有非常好的抗菌作用和藥動(dòng)力學(xué)的特性，曾經(jīng)被廣泛應(yīng)用，作為禽類(lèi)、水產(chǎn)和豬促生長(zhǎng)的添加劑。呋喃它酮在1995年被禁用。由于硝基呋喃類(lèi)藥物在體內(nèi)很快就能被代謝，而在組織中結(jié)合的代謝產(chǎn)物則能存留較長(zhǎng)的一段時(shí)間，所以管理部門(mén)就以檢測(cè)代謝產(chǎn)物為手段達(dá)到檢測(cè)硝基呋喃類(lèi)殘留的目的。
呋喃它酮代謝物快速檢測(cè)試劑盒具有方便、快速、靈敏等特點(diǎn)，適用于動(dòng)物組織（水產(chǎn)、雞、豬、牛）、牛奶等大批量樣品中的呋喃它酮代謝物快速檢測(cè)。
【測(cè)定原理】
本試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法檢測(cè)水產(chǎn)和雞肉等組織樣本中的AMOZ，在微孔條上預(yù)包被上偶聯(lián)抗原，利用抗原與抗體的特異性免疫化學(xué)反應(yīng)的原理來(lái)進(jìn)行的，樣本中的AMOZ和微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原競(jìng)爭(zhēng)抗呋喃它酮代謝物的衍生物抗體，加入酶標(biāo)記物后，用TMB底物顯色，樣品中的AMOZ含量與樣品的吸光度值呈反比，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出呋喃它酮代謝物含量。
【試劑盒技術(shù)指標(biāo)】
規(guī)       格：96孔/盒
靈敏度： 0.05ppb
檢測(cè)時(shí)間： 75min
樣本檢測(cè)下限：
組織、肝臟………………………………0.1ppb
蜂蜜、牛奶、腸衣………………………0.1ppb
魚(yú)/蝦等水產(chǎn)品組織因存在一定的干擾，檢測(cè)下限為0.15ppb
交叉反應(yīng)率：
呋喃它酮代謝物……………………………… *
*代謝物………………………………﹤0.1%
*代謝物………………………………﹤0.1%
*代謝物………………………………﹤0.1%
回收率：
組織、肝臟………………………………90%±15%
蜂蜜、牛奶、腸衣………………………80%±15%
【試劑盒組成】
1、微量測(cè)試孔：1×96孔板（12條×8孔）
2、標(biāo)準(zhǔn)液X6瓶：（1ml/瓶）0ppb、0.05ppb、0.15ppb、0.45ppb、1.35ppb、4.05ppb
3、酶標(biāo)記物      7ml………………… 紅色帽
4、抗體工作液 7ml………………… 藍(lán)色帽
5、底物A液     7 ml………………… 白色帽
6、底物B液     7 ml ………………… 黑色帽
7、終止液     　7 ml ………………… 黃色帽
8、 20X濃縮洗滌液40 ml…………… 白色帽
9、 2X濃縮復(fù)溶液 50 ml …………… 透明帽
10、衍生化試劑　 10ml ………………白色帽
【所用儀器、試劑】
具備的儀器：微孔酶標(biāo)儀、打印機(jī)、均質(zhì)器、氮?dú)獯蹈裳b置、振蕩器、離心機(jī)、刻度移液管、天平（感量0.01g）
微量移液器：?jiǎn)蔚?0µl-200µl，100µl-1000µl、多道250µl
試      劑：氫氧化鈉、乙酸乙酯、正己烷、濃HCl、*、ZnSO4•7H2O、亞硝基鐵******（K2Fe（CN）5•NO•3H2O）
【樣本前處理步驟】
樣本處理前須知
處理任何樣本時(shí)，都必須注意：
（a）本試劑盒所檢測(cè)的組織樣本包括：動(dòng)物組織、禽類(lèi)和水產(chǎn)組織。eg:雞、鴨、豬、牛、羊、兔、魚(yú)、蝦等。
（b）實(shí)驗(yàn)中必須使用一次性吸頭，在吸取不同的試劑時(shí)要更換吸頭。
（c）實(shí)驗(yàn)之前須檢查各種實(shí)驗(yàn)器具是否干凈，必要時(shí)可對(duì)實(shí)驗(yàn)器具進(jìn)行清潔，以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
樣本前處理需配制：
配液1、用去離子水將2×濃縮復(fù)溶按1：1稀釋?zhuān)?份濃縮復(fù)溶液+1份去離子水），用于提取后的樣本復(fù)溶。
配液2、C液：稱(chēng)10.7g亞硝基鐵******用去離子水定容至100ml。
配液3、D液：稱(chēng)28.8g 硫酸鋅用去離子水溶解定容至100ml。
配液4、 0.1MK2HPO4 稱(chēng)11.4g K2HPO4•3H2O加去離子水溶解定容至500ml。
配液5、 1M HCl 溶液
取8.6ml濃HCl加去離子水定容至100ml。
配液6、1M NaOH溶液
取4g NaOH加去離子水定容至100ml。
樣本的處理方法：
（a）奶樣
1、取出5ml的奶樣本到玻璃離心管中,分別加入C液和D液各250µl。
2、用振蕩器充分混合樣本,用恒溫離心機(jī)4000r/min，2-10℃離心10min.若沒(méi)有恒溫離心機(jī),則先將樣本降溫至大約8℃,然后離心。
3、接（b）的描述方法
（b）組織、蜂蜜、腸衣、肝臟
1、取1±0.05g的均質(zhì)樣本（組織、蜂蜜、腸衣、肝臟），牛奶的離心上清液1.1ml（相當(dāng)1ml奶樣），分別加入4ml的去離子水，0.5ml1M HCl和100µl衍生化試劑，充分振蕩。
2、在37℃過(guò)夜孵育（大約16h）或56℃水浴中孵育（2h）；
3、分別加入5ml 0.1M K2HPO4， 0.4 ml 1M NaOH和5ml乙酸乙酯，充分振蕩5min；
4、在室溫下（20-25℃）4000r/min以上離心10min。
5、取出2.5ml的乙酸乙酯到另一潔凈容器中于50℃氮?dú)?空氣吹干。
6、用1ml正己烷溶解干燥物，用1ml已稀釋好的復(fù)溶液充分混合30s；在室溫下（20-25℃）4000r/min以上離心10min。
7、取50µl下層相用于分析。
樣本稀釋倍數(shù)：2
（c）特殊樣本（油炸熟食、非油炸熟肉）的處理方法
1、取1±0.05g的均質(zhì)樣本于50ml離心管中，加入4.5ml甲醇和0.5ml去離子水，震蕩2min,
4000r/min離心5min，傾倒出全部液體，再加入5 ml乙腈和5ml 正己烷，震蕩2min,4000r/min離心5min傾倒出全部液體。
2、在處理后的樣本離心管中加入4ml的去離子水，0.5ml1M HCl和100µl衍生化試劑，充分振蕩。
3、接（b）第2步描述方法
【酶標(biāo)免疫分析程序】
1、使用前將試劑盒置于室溫（20-25℃）平衡30min以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
2、取出需要數(shù)量的酶標(biāo)板微孔條插入框架中，將不用的微孔條放入自封袋，保存于2-8℃不要冷凍。
3、配液：將40ml濃縮洗滌液（20倍濃縮）用去離子水按照1：19稀釋?zhuān)?份濃縮洗滌液+19份去離子水），或按所需用量配制洗滌液。
4、編號(hào)：將樣品和標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每個(gè)樣品和標(biāo)準(zhǔn)品均需做2孔平行。
5、加標(biāo)準(zhǔn)品/樣本 50µl/孔到各自的微孔中，然后加酶標(biāo)記物50µl/孔，再加入50µl /孔的抗體，用蓋板膜封板，輕輕振蕩混勻，25℃環(huán)境中反應(yīng)60min。
6、倒出孔中液體，將酶標(biāo)板倒置在吸水紙上拍打，去除孔中液體。加入250µl/孔洗滌液，15-30s后倒出孔中液體，用吸水紙拍干，如此重復(fù)操作共洗板5次。
7、顯色：每孔加入底物A液50µl，再加入底物B液50µl，輕輕振蕩混勻，25℃環(huán)境避光顯色15min。
8、測(cè)定：每孔加入終止液50µl，輕輕振蕩混勻，設(shè)定酶標(biāo)儀于450nm處（建議用雙波長(zhǎng)450/630nm檢測(cè)），測(cè)定每孔吸光度值（OD值）。
【結(jié)果判定】
結(jié)果判定有兩種方法，粗略判定可用第1種方法，定量判定用第2種方法。注意樣本吸光值與AMOZ的含量成負(fù)相關(guān)。
1、粗略判定：
用樣品的平均吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)值比較即可得出樣本所含AMOZ濃度范圍（ng/ml）。假設(shè)樣品1的吸光度值為0.238，樣品2的吸光度值為1.130，標(biāo)準(zhǔn)液吸光度值分別是：0ppb為1.721；0.05ppb為1.454；0.15ppb為1.153； 0.45ppb為0.667； 1.35ppb為0.295； 4.05ppb為0.106。則樣品1的濃度范圍1.35ppb-4.05ppb；樣品2的濃度范圍0.15ppb-0.45ppb。乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中AMOZ實(shí)際濃度。
2、定量判定：
所獲得的每個(gè)濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣本吸光度值的平均值（B）除以*個(gè)標(biāo)準(zhǔn)（0標(biāo)準(zhǔn)）的吸光度值（B0）再乘以*，即百分吸光度值。

以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo)，以AMOZ標(biāo)準(zhǔn)品濃度（ng/ml）的半對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對(duì)應(yīng)的濃度，乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中AMOZ實(shí)際濃度。
若利用試劑盒專(zhuān)業(yè)分析軟件進(jìn)行計(jì)算，更便于大量樣品的準(zhǔn)確、快速分析。
3、標(biāo)準(zhǔn)曲線：
B/B0 （%）

      0.05      0.15         0.45       1.35      4.05
AMOZ（ppb） [µg/kg]
圖1：呋喃它酮代謝物檢測(cè)試劑盒的回歸曲線
4、再現(xiàn)性：
%CV

AMOZ（ppb） [µg/kg]
圖2：呋喃它酮代謝物檢測(cè)試劑盒的精密度
由多個(gè)不同的實(shí)驗(yàn)結(jié)果確定了精密度，圖2顯示出呋喃它酮代謝物檢測(cè)試劑盒的精密度情況，獲得的標(biāo)準(zhǔn)吸收值的變異系數(shù)（%CV）對(duì)相應(yīng)呋喃它酮濃度作曲線，可以看到在全部范圍內(nèi)變異系數(shù)如此之低，可以得到很好的再現(xiàn)性。
【注意事項(xiàng)】
1、使用前將所有試劑溫度回升至室溫20-25℃。試劑及標(biāo)本沒(méi)有回到室溫（20-25℃）會(huì)導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。
2、在洗板過(guò)程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況，則會(huì)伴隨著出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性，重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。
3、混合要均勻，否則會(huì)出現(xiàn)重復(fù)性不好的現(xiàn)象。
4、反應(yīng)終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。
5、不要使用過(guò)了有效日期的試劑盒，稀釋或攙雜使用會(huì)引起靈敏度、OD值的變化。不要交換使用不同批號(hào)的盒中試劑。
6、不用的微孔板放進(jìn)自封袋密封；標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和無(wú)色的發(fā)色劑對(duì)光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。
7、顯色液若有任何顏色表明變質(zhì)，應(yīng)當(dāng)棄之。0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值小于0.5個(gè)單位（A450nm<0.5 ）時(shí)，表示試劑可能變質(zhì)。
8、該試劑盒*反應(yīng)溫度為25℃，溫度過(guò)高或過(guò)低將導(dǎo)致檢測(cè)吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。
【儲(chǔ)存】
原包裝應(yīng)儲(chǔ)存于2～8℃保鮮冷藏，切勿冷凍。
【有效期】
有效期12個(gè)月;生產(chǎn)日期、有效期、生產(chǎn)批號(hào)見(jiàn)外包裝