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萊克多巴胺快速檢測(cè)試劑盒

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更新時(shí)間：2016-03-13 22:18:06瀏覽次數(shù)：478次

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蘇州艾瑞德生物科技有限公司

經(jīng)營(yíng)模式：生產(chǎn)廠家

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

萊克多巴胺屬于β-興奮劑類藥物，可提高胴體瘦肉率，曾被廣泛添加于飼料中。人食用了含萊克多巴胺殘留的動(dòng)物性食品，會(huì)出現(xiàn)肌肉震顫、心悸、過(guò)敏、頭痛目眩、惡心、嘔吐、發(fā)燒、顫栗等癥狀，世界各國(guó)已明文禁止其使用。常規(guī)儀器檢測(cè)方法不能滿足實(shí)際生產(chǎn)中大批量檢測(cè)的需求。萊克多巴胺快速檢測(cè)試劑盒具有方便、快速、靈敏等特點(diǎn)，適用于大批量樣品快速檢測(cè)。

詳細(xì)介紹

【測(cè)定原理】

本試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA法檢測(cè)尿樣和組織等樣本中的萊克多巴胺，在微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原，利用抗原與抗體的特異性免疫化學(xué)反應(yīng)的原理來(lái)進(jìn)行，樣本中的克倫特羅和微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原競(jìng)爭(zhēng)標(biāo)記有辣根過(guò)氧化酶的抗萊克多巴胺抗體，通過(guò)洗滌后，用TMB底物顯色，樣品中的萊克多巴胺含量與樣品的吸光度值呈反比，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出萊克多巴胺含量。
【試劑盒技術(shù)指標(biāo)】
規(guī)      格：96孔/盒
靈敏度： 0.1ppb
檢測(cè)時(shí)間： 45min
樣本檢測(cè)下限：
尿     樣 …………………………………   0.1ppb
組    織（處理法一）…………………… 0.4ppb
肉樣本（處理法二）…………………… 0.1ppb
肝樣本（處理法二）…………………… 0.2ppb
飼    料 …… ……………………………   1ppb
交叉反應(yīng)率：
萊克多巴胺（Ractopamine）……………… *
克倫特羅（Clenbuterol）…………………    <0.1%
*（Salbutamol ）…………………    <0.1%
多巴酚丁胺（dobutamine）………………   <0.1%
樣本回收率：
尿     樣   ……………………… 95%±10%
組     織   ……………………… 85%±15%
飼     料   ……………………… 85%±15%
【試劑盒組成】
1、微量測(cè)試孔：1×96孔板（12條×8孔）
2、（Clenbuterol標(biāo)準(zhǔn)溶液X6瓶：（1ml/瓶）0ppb、0.1ppb、0.3ppb、0.9ppb、2.7ppb、8.1ppb
3、酶標(biāo)記抗體工作液 10ml………………綠色帽
4、底物A液     7ml ……………………白色帽
5、底物B液     7ml ……………………黑色帽
6、終止液     7ml ……………………黃色帽
7、 20X濃縮洗滌液40 ml ………………透明帽

酶標(biāo)免疫分析程序
測(cè)定前應(yīng)須知：
1、使用之前將所有試劑和需用板條的溫度回升至室溫（20-25℃）。
2、使用之后立即將所有試劑放回2-8℃。
3、在ELISA分析中的再現(xiàn)性，很大程度上取決于洗板的*性，正確的洗板操作是ELISA測(cè)定程序中的要點(diǎn)。
4、在所有恒溫孵育過(guò)程中，避免光線照射，用蓋板膜封住微孔板。
操作步驟：
1、將所需試劑從4℃冷藏環(huán)境中取出，置于室溫（20-25℃）平衡30min以上, 注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
2、取出需要數(shù)量的微孔板及框架，將不用的微孔板放入自封袋，保存于2-8℃不要冷凍。
3、編號(hào)：將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行，并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。
4、加標(biāo)準(zhǔn)品/樣本20µl/孔到各自的微孔中，然后加酶標(biāo)記抗體80µl/孔，用蓋板膜封板，輕輕振蕩混勻，25℃環(huán)境中反應(yīng)30min。
5、小心揭開(kāi)蓋板膜，將孔內(nèi)液體甩干，用去離子水250µl/孔充分洗滌4-5次，每次間隔15-30秒，用吸水紙拍干（拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破）。
6、顯色：每孔加入底物A液50µl，再加底物B液50µl，輕輕振蕩混勻25℃環(huán)境避光顯色15min。
7、測(cè)定：每孔加入終止液50µl，輕輕振蕩混勻，設(shè)定酶標(biāo)儀于450nm處（建議用雙波長(zhǎng)450/630nm，檢測(cè)在5min內(nèi)讀完數(shù)據(jù)）測(cè)定每孔OD值。
【結(jié)果判定】
結(jié)果判定有兩種方法，粗略判定可用第1種方法，定量判定用第2種方法。注意樣本吸光值與其所含萊克多巴胺量成負(fù)相關(guān)。
1、用樣本的平均吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)值比較即可得出其濃度范圍（ng/ml）。例如樣本1的吸光度值為0.311，樣本2的吸光度值為0.715，標(biāo)準(zhǔn)品吸光度值分別是： 0ppb為1.642；0.1ppb為1.200；0.3ppb為0.780；0.9ppb為0.454； 2.7ppb為0.236；8.1ppb為0.142。則樣本1的濃度范圍是0.9ppb-2.7ppb，樣本2的濃度范圍是0.3ppb-0.9ppb。乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中萊克多巴胺的實(shí)際濃度。
2、定量分析
（1）百分吸光率的計(jì)算，標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光度值的平均值（雙孔）除以*個(gè)標(biāo)準(zhǔn)（0標(biāo)準(zhǔn)）的吸光度值，再乘以*，即
百分吸光度值（%）＝ B ×*

B—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值
B0—0ng/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值
（2）標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計(jì)算
以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo)，以萊克多巴胺標(biāo)準(zhǔn)品濃度（ng/ml）的半對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對(duì)應(yīng)的濃度，乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中萊克多巴胺的實(shí)際濃度。
若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行計(jì)算，更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。（索?。?/span>
3、標(biāo)準(zhǔn)曲線：
B/B0 （%）

                          Ract（ppb） [µg/kg]
              圖1：萊克多巴胺檢測(cè)試劑盒的回歸曲線
4、再現(xiàn)性：
%CV

                             Ract （ppb） [µg/kg]
                  圖2：萊克多巴胺檢測(cè)試劑盒的精密度
由多個(gè)不同的實(shí)驗(yàn)結(jié)果確定了精密度，圖2顯示出萊克多巴胺檢測(cè)試劑盒的精密度情況，獲得的標(biāo)準(zhǔn)吸收值的變異系數(shù)（%CV）對(duì)相應(yīng)萊克多巴胺濃度作曲線，可以看到在全部范圍內(nèi)變異系數(shù)如此之低，可以得到很好的再現(xiàn)性。
【注意事項(xiàng)】
1、使用前將所有試劑溫度回升至室溫20-25℃。試劑及標(biāo)本沒(méi)有回到室溫（20-25℃）會(huì)導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。
2、在洗板過(guò)程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況，則會(huì)伴隨著出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性，重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。
3、混合要均勻，否則會(huì)出現(xiàn)重復(fù)性不好的現(xiàn)象。
4、反應(yīng)終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。
5、不要使用過(guò)了有效日期的試劑盒，稀釋或攙雜使用會(huì)引起靈敏度、OD值的變化。不要交換使用不同批號(hào)的盒中試劑。
6、不用的微孔板放進(jìn)自封袋密封；標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和無(wú)色的發(fā)色劑對(duì)光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。
7、顯色液若有任何顏色表明變質(zhì)，應(yīng)當(dāng)棄之。0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值小于0.5個(gè)單位（A450nm<0.5 ）時(shí)，表示試劑可能變質(zhì)。
8、該試劑盒*反應(yīng)溫度為25℃，溫度過(guò)高或過(guò)低將導(dǎo)致檢測(cè)吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。
【儲(chǔ)存】
原包裝應(yīng)儲(chǔ)存于2～8℃保鮮冷藏，切勿冷凍。
【有效期】
有效期12個(gè)月;生產(chǎn)日期、有效期、生產(chǎn)批號(hào)見(jiàn)外包裝。