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elisa試劑盒應(yīng)用的范圍很廣,而且正在不斷地?cái)U(kuò)大,原則上elisa試劑盒可用于檢測(cè)一切抗原、抗體及半抗原,可以直接定量測(cè)定體液中的可溶性抗原。酶免疫試驗(yàn)(EIA)結(jié)合光學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡可進(jìn)行抗原定位與結(jié)構(gòu)的研究,用酶標(biāo)記抗原或抗體結(jié)合免疫擴(kuò)散及免疫電泳可提高試驗(yàn)的敏感性。檢查抗原和半抗原方面:在內(nèi)分泌方面已經(jīng)用于檢測(cè)雌性激素、絨毛膜*、黃體素、胰島素、*、促甲狀腺素和孕酮等,其敏感性與RIA相當(dāng),在血液學(xué)方面可用于檢查凝固因子(如第Ⅷ凝固因子)、紅細(xì)胞抗原及結(jié)合球蛋白(Hapto Globin)等,在腫瘤方面已試用檢查甲胎蛋白(AFP)癌胚抗原(CEA),對(duì)前者的敏感性已達(dá)到與放射免疫試驗(yàn)相當(dāng)?shù)乃?,但?duì)CEA檢查的敏感性較低,目前尚不能用于常規(guī)診斷,在傳染病的診斷方面正在日益擴(kuò)大,其中zui滿意的是用于檢查乙型肝炎表面抗原,國(guó)內(nèi)外已有elisa試劑盒檢測(cè)的商品供應(yīng)。檢查抗體方面:用elisa試劑盒間接法檢查抗體,已獲得對(duì)多種傳染病和寄生蟲病的血清學(xué)診斷,亦開始廣泛用于現(xiàn)場(chǎng)流行病學(xué)調(diào)查。在免疫性疾病方面有試用作自身疫病抗體測(cè)定以及對(duì)過(guò)敏的診斷,例如檢測(cè)各種過(guò)敏原的抗體、DNA抗體及甲狀腺球蛋白抗體,紅斑性痕瘡抗體等等。
大鼠elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)規(guī)則:
1、要保證移液槍的準(zhǔn)確性,誤差不能超過(guò)2%??捎盟碗娮犹炱竭M(jìn)行確定。但有專業(yè)人員進(jìn)行矯正。
2、要配備20ul、50ul、100ul、1000ul和排槍各一支。吸取不同的液體后,要更換槍頭。即使是吸取標(biāo)準(zhǔn)品時(shí)。
3、要在實(shí)驗(yàn)前1小時(shí)將試劑盒從冰箱中取出,使各種試劑都恢復(fù)到室溫,以使結(jié)果更穩(wěn)定。
4、實(shí)驗(yàn)時(shí),要使底物避光保存。
5、用槍吸取液體時(shí)速度不能太快,以免產(chǎn)生氣泡而使吸取量不準(zhǔn)確。
6、吸取液體時(shí),要用量程和需要量接近的槍去吸,減少誤差。
7、將液體加到酶標(biāo)孔中時(shí),避免槍頭和孔內(nèi)液體接觸,可使槍頭上的液滴和孔壁接觸,液滴會(huì)自然流下去。
8、液體全部加完后,可將酶標(biāo)板在桌子上平行輕輕晃動(dòng)30秒,混勻液體。也可以用酶標(biāo)儀的晃動(dòng)功能。
9、溫浴時(shí),要用不干膠或膠帶紙封好酶標(biāo)板,防止水分的蒸發(fā)。
10、洗板時(shí),每次洗液加入后,應(yīng)靜置1分鐘,使清洗更加*。沒(méi)有洗板機(jī)時(shí),倒去液體后,要將酶標(biāo)板在報(bào)紙或毛紙上用力拍干。
11、洗液不夠時(shí),可用蒸餾水自行配制PH7.4,0.02M的磷酸緩沖液,加入0.1%的吐溫20作為洗液。加入1/1000的疊氮鈉后可長(zhǎng)期保存。
12、底物是光敏感的,要在臨用前現(xiàn)配。
13、檢測(cè)前,要打開酶標(biāo)儀,使之穩(wěn)定10分鐘以上。
14、底物有一定的毒性,終止液對(duì)皮膚有腐蝕性,應(yīng)盡量避免接觸。
15、待檢樣品要澄清,否則會(huì)影響結(jié)果。
16、溫浴時(shí)間應(yīng)遵守試劑盒規(guī)定。
17、應(yīng)盡量做雙孔實(shí)驗(yàn),這樣才能保證數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。
18、對(duì)結(jié)果有疑問(wèn)的樣品要用其它方法進(jìn)行確證。
大鼠elisa試劑盒 注意事項(xiàng)
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
4.請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值),請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測(cè)定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物請(qǐng)避光保存。
7.嚴(yán)格按照說(shuō)明書的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9.本試劑不同批號(hào)組分不得混用。
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