特別提醒：本產(chǎn)品僅供科研研究使用，不得用于人體臨床直接檢測。
產(chǎn)品名稱：過氧化氫（H2O2）測試盒微量法
產(chǎn)品規(guī)格：100管/96樣
檢測方法：微量法
產(chǎn)品貨號：BK-01S6408
產(chǎn)品分類：氧化與抗氧化系列
商品介紹：
測定意義: H2O2是生物體內(nèi)最常見的活性氧分子，主要由SOD和XOD等催化產(chǎn)生，由CAT和POD等催化降解。H2O2不僅是重要的活性氧之一，也是活性氧相互轉(zhuǎn)化的樞紐。一方面，H2O2可以直接或間接地氧化細(xì)胞內(nèi)核酸，蛋白質(zhì)等生物大分子，并使細(xì)胞膜遭受損害，從而加速細(xì)胞的衰老和解體；另一方面H2O2也是許多氧化應(yīng)急反應(yīng)中的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子。 測定原理： H2O2與硫酸鈦生成黃色的過氧化鈦復(fù)合物，在415nm有特征吸收。 需自備的儀器和用品： 可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、丙酮60mL、濃鹽酸10mL、研缽和冰。 |
所需的儀器和用品：
可見分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶（SOD）的測定：
建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個樣本做預(yù)測定，了解本批樣品情況，熟悉實(shí)驗(yàn)流程，避免實(shí)驗(yàn)
樣本和試劑浪費(fèi)！
1、樣本制備
① 組織樣本： 取約 0.1g 組織（水分充足的樣本可取 0.25g），加入 1mL 提取液，在 4oC 或冰浴進(jìn)行 勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min，取上清作為待測液。 【注】：若增加樣本量，可按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例進(jìn)行提取
| ② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本： 先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；取約 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）； 12000rpm 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。 【注】：若增加樣本量，可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量（10 4）：提取液（mL）為 500~1000：1 的比例進(jìn)行提取。 ③ 液體樣本：直接檢測；若渾濁，離心后取上清檢測。 |
實(shí)驗(yàn)方法學(xué)：
一、肝素的配制：
市售肝素凍干粉140單位/mg，1克瓶裝，每瓶140，000單位，稱取0.1克肝素凍干粉，加生理鹽水5ml，配成2800單位/ml。取50～100μl濕潤管壁，可抗凝人血3～5ml，血液不會凝固。老鼠血易凝固，所以最好更濃一些?？梢匀?.1克肝素凍干粉，加3ml生理鹽水溶解后，取50～100μl,可抗凝鼠血2～4ml。
肝素抗凝管的制備：取0.1克肝素凍干粉，加2.5ml生理鹽水。取100μl～150μl滴入塑料或玻璃管中，濕潤管壁，低于80℃小烤箱中（可以用烤面包的小烤箱），橫向轉(zhuǎn)動，每隔5～10分鐘轉(zhuǎn)動一次，直至干燥后放入4℃保存，可使2～5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集：
全血根據(jù)收集的條件，分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí)，不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清；抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1～2小時(shí)，直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血，輕輕顛倒充分抗凝后，可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征，選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。
選擇抗凝的注意點(diǎn)：
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致，同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒，充分抗凝，防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對較多（1ml抗凝全血能分離出0.4～0.5ml血漿）;
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后，解凍時(shí)可能會出現(xiàn)絮狀渾濁，如有則需要離心去掉渾濁后
用于測定。
10mg 氨甲喋呤 Amethopterin -20℃保存
2 ug pFLAG-CMV-3 pFLAG-CMV-3 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
四硫磺酸鈉亮綠培養(yǎng)基（TTB） Tetrathionate Broth Base 250g
1瓶 Ehrlich細(xì)胞株 Ehrlich 低溫運(yùn)輸和保存
VRB-MUG瓊脂 100g
10000U MMLV逆轉(zhuǎn)錄 MMLV Reverse Transcriptase -20℃保存
250mL Phosphate Buffer，0.5M, pH7.0 Phosphate Buffer，0.5M, pH7.0 常溫保存
20次 一站式TA克隆試劑盒(含感受態(tài)) One-Stop AT Cloning Kit -20℃保存
2 ug pAP-1-Luc pAP-1-Luc 低溫運(yùn)輸，-20℃保存
200 mL 大鼠淋巴細(xì)胞分離液1.083 Cell Separation Solution -20℃保存
1瓶 VERO C1008(E6)細(xì)胞株 VERO C1008(E6) 低溫運(yùn)輸和保存
過氧化氫（H2O2）測試盒微量法PRMT6 組蛋白甲基轉(zhuǎn)移6抗體 規(guī)格: 0.1ml
Rabbit Anti-chicken IgG/Cy5.5 Cy5.5標(biāo)記的兔抗雞IgG 規(guī)格: 0.1ml
IGFALS/ALS 胰島素樣生因子酸不穩(wěn)定亞基ALS抗體 規(guī)格: 0.2ml
phospho-Tau protein(Ser404) 磷酸化微管相關(guān)蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
Phospho-Jak3 (Tyr785) 磷酸化蛋白酪激JAK-3抗體 規(guī)格: 0.1ml
SCN11A/NAV1.9 鈉通道蛋白11α抗體 規(guī)格: 0.2ml
GNRPX/PLEKHJ1 核苷酸結(jié)合蛋白X抗體 規(guī)格: 0.2mlRabbit Anti-mouse IgM/Bio 標(biāo)記的兔抗小鼠IgM 規(guī)格: 0.3ml
PERK 蛋白激樣內(nèi)質(zhì)網(wǎng)激抗體 規(guī)格: 0.2mlG3BP1 Ras GTP活化蛋白結(jié)合蛋白1抗體 規(guī)格: 0.1ml
phospho-IRS1(Thr176) 磷酸化胰島素受體底物1抗體 規(guī)格: 0.1mlACADVL ?；oA脫很鏈抗體 0.2ml
SEMA4D/CD100 臂板蛋白4D抗體 規(guī)格: 0.2mlGoat Anti-Bovine IgG/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555標(biāo)記的羊抗牛IgG 規(guī)格: 0.1ml
human Fibrinogen 抗體 規(guī)格: 0.2mlFactor X 凝因子10抗體 規(guī)格: 0.2ml
Somatostatin/GRIH 生抑素抗體 規(guī)格: 0.1mlPhospho-Ack1(Tyr326) 磷酸化Ack1抗體 0.1ml
注意事項(xiàng)：
1、試劑二為酶，不可冷凍，使用時(shí)在冰上放置。
2、對照管只需要做一管。
3、若對照管吸光值大于2，建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用（10μl試劑二原液+60μl蒸餾水）。
4、SOD為什么有的樣本測定管大于對照管，對照管數(shù)值在什么范圍？
對照管的范圍是0.8-2。對照管吸光值過低可能是（1）試劑二或試劑四沒有現(xiàn)配現(xiàn)用；（2)沒有按順序加試劑；（3）反應(yīng)時(shí)間不夠，可以延長反應(yīng)時(shí)間（反應(yīng)時(shí)間30min可以延長到40min）。對照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應(yīng)倍數(shù)。
若出現(xiàn)測定管大于對照管，可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大，為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測，通?？梢允箿y定正常。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
