1、原理及適用范圍
副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)是一種廣泛分布于海洋與鹽湖中的嗜鹽性細(xì)菌,海產(chǎn)品中常有此菌,它是引起食源性疾病的主要病原之一,是夏、秋季沿海地區(qū)食物中毒和急性腹瀉的重要病原。據(jù)國家食源性疾病監(jiān)測網(wǎng)統(tǒng)計(jì),我國近年由副溶血弧菌引起的食物中毒呈顯著上升趨勢,已成為我國一個(gè)嚴(yán)重的食源性公共衛(wèi)生問題之一。該菌引起的食物中毒臨床上表現(xiàn)為:上腹部疼痛、腹瀉、、嘔吐、發(fā)熱等,腹瀉多為水樣便,亦有大便膿血,隨后腹部劇烈疼痛,持續(xù)1~2天。
副溶血弧菌測試片(FilmplateTM Vibrio parahaemolyticus BH209)是一種商品化的一次性培養(yǎng)基產(chǎn)品,含有高選擇性培養(yǎng)基、吸水凝膠和特異酶指示劑等重要成分,培養(yǎng)15~24h就可確認(rèn)是否原菌的存在,大大地簡化了檢測程序,更加適合衛(wèi)生監(jiān)督檢驗(yàn)部門和食品生產(chǎn)加工企業(yè)使用。 本產(chǎn)品適用于水產(chǎn)品、海產(chǎn)品及其腌、熟制品、水產(chǎn)調(diào)味品等的快速檢測。 參照標(biāo)準(zhǔn):食品衛(wèi)生微生物學(xué)檢驗(yàn)副溶血性弧菌檢驗(yàn)(GB/T 4789.7-2008)。
2、操作方法
2.1、樣品處理:取樣品25mL(g)放入含有225mL滅菌3.5%氯化鈉水溶液的取樣罐或均質(zhì)杯內(nèi),制成1:10的樣品勻液。
2.2、接種:將副溶血弧菌測試片(BH209)置于平坦實(shí)驗(yàn)臺面,揭開上層膜,用無菌吸管吸取1mL樣品勻液緩慢均勻地滴加到紙片上,然后再將上層膜緩慢蓋下,靜置10s左右,使培養(yǎng)基凝固。每個(gè)樣品接種兩片,同時(shí)做一片空白陰性對照。
2.3、培養(yǎng):將測試片疊在一起放回原自封袋中并封口,透明面朝上水平置于恒溫培養(yǎng)箱內(nèi),堆疊片數(shù)不超過12片。培養(yǎng)溫度為36℃±1℃,培養(yǎng)15~24h。
3、結(jié)果判讀
呈紫色的菌落為副溶血弧菌。多數(shù)非目的菌在測試片上不生長,少數(shù)能生長,如創(chuàng)傷弧菌和霍亂弧菌,但菌落呈藍(lán)色,明顯區(qū)別于目的菌。出現(xiàn)陽性菌落的樣本,用其他更為可靠的方法進(jìn)行驗(yàn)證,沒有條件的至少要再取樣重復(fù)檢驗(yàn)一次。
4、報(bào)告方式
在25g(或25ml)樣品中檢出或未檢出副溶血性弧菌。
5、附加說明
5.1、根據(jù)技術(shù)中心所做的對比試驗(yàn)結(jié)果表明,副溶血弧菌測試片具有較高的檢測靈敏度和準(zhǔn)確性,對純菌的檢測靈敏度達(dá)到8cfu/mL,與中華人民共和國出入境檢驗(yàn)檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)(SN)方法符合率達(dá)到90%以上(中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志2008,18(12):2621-2623)。
5.2、注意使用過的測試片上帶有活菌,需及時(shí)按照生物安全廢棄物處理原則進(jìn)行處理。
6、保存條件
本產(chǎn)品需存放在4℃~10℃冰箱中,保質(zhì)期為一年,鋁箔袋打開后,未用完的紙片要放回鋁箔袋中封好,放到冰箱中,一個(gè)月內(nèi)用完。在高濕度的環(huán)境中可能出現(xiàn)冷凝水,在拆封前將整包回溫至室溫。