多發(fā)骨髓瘤細胞人胚膀胱組織來源細胞在培養(yǎng)液中呈懸浮狀態(tài)的懸浮期.此時,細胞質(zhì)回縮,胞體呈圓球形.然后細胞貼附于載體表面,稱貼壁,懸浮期結(jié)束. 細胞貼壁速度與細胞種類,培養(yǎng)基成分,載體的理化性質(zhì)等密切相關(guān)。一般情況下,原代培養(yǎng)細胞貼壁速度慢,可達0-24 小時或更多,而傳代細胞系貼壁速度快,通常0-30 分鐘即可貼壁。細胞貼壁后還需經(jīng)過一個潛伏階段,才進入生長和增殖期.原代培養(yǎng)細胞潛伏期,約24-96 小時或更長,連續(xù)細胞系和腫瘤細胞潛伏期短,僅需6-24 小時。
細胞指數(shù)增生期(logarithmic growth phase) 這是細胞增殖zui旺盛的階段,分裂相細胞增多。指數(shù)增生期細胞分裂相數(shù)量可作為判定細胞生長是否旺盛的一個重要標志。通常以細胞分裂相指數(shù)(Mitotic index,MI)表示,即細胞群中每000 個細胞中的分裂相數(shù)。一般細胞的分裂指數(shù)介于0.%-0.5%,原 代細胞分裂指數(shù)較低,而連續(xù)細胞和腫瘤細胞分裂相指數(shù)可高達3%-5%。多發(fā)骨髓瘤細胞指數(shù)增生期的細胞是細胞活力時期,是進行各種實驗*時期,也是凍存細胞的時機。在接種細胞數(shù)量適宜情況下,指數(shù)增生期持續(xù)3-5 天后,隨著細胞數(shù)量不斷增多、生長空間減少,zui后細胞相互接觸匯合成片。
正常細胞相互接觸后能抑制細胞運動,這種現(xiàn)象稱接觸抑制現(xiàn)象(contact inhibition)。而惡性腫瘤細胞無接觸抑制現(xiàn)象,能繼續(xù)移動和增殖,導(dǎo)致細胞向三維空間擴展,使細胞發(fā)生堆積(piled up)。細胞接觸匯合成片后,雖然發(fā)生接觸抑制,但只要營養(yǎng)充分,細胞仍能進行增殖分裂,因此細胞數(shù)仍然在增多。但是,當細胞密度進一步增大,培養(yǎng)液中營養(yǎng)成分減少,代謝產(chǎn)物增多時,細胞因營養(yǎng)枯竭和代謝產(chǎn)物的影響,導(dǎo)致細胞分裂停止,這種現(xiàn)象稱密度抑制現(xiàn)象(Density Inhibition)。
培養(yǎng)細胞注意事項:
實驗進行前,無菌室及無菌操作臺(laminarflow)以紫外燈照射30-60分鐘滅菌,以70%ethanol擦拭無菌操作抬面,并開啟無菌操作臺風扇運轉(zhuǎn)0分鐘后,才開始實驗操作。每次操作只處理一株細胞株,且即使培養(yǎng)基相同亦不共享培養(yǎng)基,以避免失誤混淆或細胞間污染。實驗完畢后,將實驗物品帶出工作臺,以70%ethanol擦拭無菌操作抬面。操作間隔應(yīng)讓無菌操作臺運轉(zhuǎn)0分鐘以上后,再進行下一個細胞株之操作。
無菌操作工作區(qū)域應(yīng)保持清潔及寬敞,必要物品,例如試管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暫時放置,其它實驗用品用完即應(yīng)移出,以利于氣流之流通。實驗用品以70%ethanol擦拭后才帶入無菌操作臺內(nèi)。實驗操作應(yīng)在抬面之無菌區(qū)域,勿在邊緣之非無菌區(qū)域操作。
小心取用無菌之實驗物品,避免造成污染。勿碰觸吸管尖頭部或是容器瓶口,亦不要在打開之容器正上方操作實驗。容器打開后,以手夾住瓶蓋并握住瓶身,傾斜約45°角取用,盡量勿將瓶蓋蓋口朝上放置桌面。
工作人員應(yīng)注意自身之安全,須穿戴實驗衣及手套后才進行實驗。對于來自人類或是病毒感染之細胞株應(yīng)特別小心操作,并選擇適當?shù)燃壷疅o菌操作臺(至少ClassⅡ)。操作過程中,應(yīng)避免引起aerosol之產(chǎn)生,小心毒性藥品,例如DMSO及TPA等,并避免尖銳針頭之傷害等。
公司其他類型產(chǎn)品信息:亮綠SF(淡黃),suan"性綠5,亮綠(淡黃),亮綠G,亮綠S,亮綠GN,suan"性綠,黃色淺綠SF,淡綠SF淡黃,Light green SF yellowish
萘酚綠B,suan"性綠O,suan"性綠I,顏料綠,媒染草綠,-亞硝基--萘酚鐵色淀,-亞硝基--萘酚-6-磺suan"鈉鐵鹽,曬化綠B,萘酚綠BN,三[5,6-二氫-5-(羥基亞氨)-6-氧代--萘磺suan"(-)-N5,O6]鐵suan"(III)三鈉,Naphthol green B
固綠FCF,堅牢綠FCF,固綠,快綠,F(xiàn)ast green FCF
溴甲酚綠,溴甲酚藍,四溴間甲酚磺,3,3′,5,5′-四溴間甲酚磺suan",Bromocresol green
溴甲酚綠鈉,溴甲酚藍鈉,3,3′,5,5′-四溴間甲酚磺suan"鈉鹽,Bromocresol green sodium salt
溴甲酚綠-甲基紅指示劑溶液,Bromocresol Green,Methyl Red mixed indicator solution
溴甲酚綠-甲基紅指示劑粉枕,Bromocresol Green,Methyl Red mixed indicator powder
次甲基綠,堿性綠5,亞甲基綠,Methylene green
甲基綠,[α-[P-(二甲基氨基)ben"基]-α-[4-(二甲基亞氨基)-,5-環(huán)己二烯--亞基]-P-甲ben"基]乙基二甲基銨lv"溴化物,Methyl Green
健那綠,真那氏綠,詹納斯綠B,健那綠B,雙氮嗪綠,詹姆斯綠B,煙魯綠,3-(二乙基氨基)-7-[[4-(二甲基氨基)ben"基]偶氮]-5-ben"基吩嗪翁lv"化物,杰油綠B ,Januˊs green B
刃天青,刃天青鈉,樹脂天青,天蘭化鈉,偶氮間ben"四酚,樹脂酚天青,Resazurin sodium salt