異檸檬酸裂解酶(ICL)測試盒_乙醛酸循環(huán)系列
測定方法:分光光度法
產(chǎn)品規(guī)格:50管/48樣
注 意:正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
異檸檬酸裂解酶(ICL)測試盒_乙醛酸循環(huán)系列
測定意義:
ICL(EC4.1.3.1)主要存在于植物和微生物中,油料作物種子在萌發(fā)過程中,通過乙醛酸循環(huán)及其他過程將脂肪轉(zhuǎn)變成碳水化合物。ICL 是乙醛酸循環(huán)的關(guān)鍵酶之一。
測定原理:
ICL 催化異檸檬酸降解為乙醛酸和琥珀酸,乙醛酸和 NADH 在 LDH 的作用下生成乙醇和NAD,NADH 在 340nm 下有特征吸收峰,監(jiān)測 340nm 吸光度的減小速率可間接反應(yīng) ICL 活性。
需自備的儀器和用品:
紫外分光光度計(jì)、臺式離心機(jī)、水浴鍋、移液器、1mL 石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水
試劑組成和配制:
提取液:液體 50mL×1 瓶,4℃保存;
試劑一:液體 15mL×1 瓶,4℃保存;
試劑二:液體 15mL×1 瓶,4℃保存;
試劑三:粉劑×3 瓶,-20℃保存;臨用前每瓶加入 5mL 蒸餾水,充分混勻待用;用不完的試劑仍-20℃保存;
試劑四:粉劑×3 瓶,-20℃保存;臨用前每瓶加入 5mL 蒸餾水,充分混勻待用;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融。
試劑五:液體 800μL×2 支,4℃保存;臨用前每支加入 560μL 蒸餾水,充分混勻待用;用不完的試劑仍 4℃保存;
試劑六:粉劑×3 瓶,4℃保存;臨用前每瓶加入 5mL 蒸餾水,充分混勻待用。用不完的試劑-20℃保存;
樣本的前處理:
1、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104 個):提取液體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次); 15000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。
2、組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。15000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。