其它系列_莽草酸脫氫酶(SD)測試盒
測定方法:微量法
產(chǎn)品規(guī)格:100管/96樣
注 意: 正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義:
莽草酸途徑是存在于植物、真菌和微生物中的一條重要的代謝途徑,莽草酸脫氫酶是莽草酸合成途徑中的關鍵酶。
其它系列_莽草酸脫氫酶(SD)測試盒
測定原理:
莽草酸脫氫酶催化莽草酸和NADP產(chǎn)生NADPH,檢測340nm下的吸光值增加速率來表示SD活性。
需自備的儀器和用品:
紫外分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
試劑組成和配制:
提取液:液體100mL×1瓶,4℃保存;
試劑一:液體25mL×1瓶,4℃保存;
試劑二:粉劑×2瓶,4℃保存;
粗酶液提?。?/p>
細菌或培養(yǎng)細胞:先收集細菌或細胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細菌或細胞數(shù)量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
測定步驟:
1、分光光度計或酶標儀預熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至340nm,蒸餾水調(diào)零。
2、樣本測定
(1)在試劑二中加入10mL試劑一充分溶解混勻,置于37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)水浴5min,現(xiàn)配現(xiàn)用。
(2)在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL樣本和190μL試劑二,混勻,立即記錄340nm處20s時的吸光值A1和 5min20s后的吸光值A2,計算ΔA=A2-A1。