其它系列_肉桂醇脫氫酶(CAD)測試盒
測定方法:微量法
產(chǎn)品規(guī)格:100管/96樣
注 意 :正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義:
CAD是木質(zhì)素生物合成途徑中的關(guān)鍵酶之一,是木質(zhì)素單體合成反應(yīng)中的后一步,催化多種不同的肉桂醛(香豆醛、芥子醛以及松柏醛等)生成與之相應(yīng)的肉桂醇。該酶多存在于高等植物、酵母、菌類中,研究該酶可以探討多種生物細(xì)胞發(fā)育過程中木質(zhì)素沉積的代謝機(jī)理,為減少水果石細(xì)胞含量提高其品質(zhì)提供依據(jù)。
其它系列_肉桂醇脫氫酶(CAD)測試盒
測定原理:
CAD催化肉桂醇和NADP生成肉桂醛和NADPH,在340nm下測定NADPH生成速率,即可反映CAD活性。
需自備的儀器和用品:
紫外分光光度計/酶標(biāo)儀、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
提取液:100mL×1瓶,4℃保存;
試劑一:液體25 mL×1瓶, 4℃保存;
試劑二:粉劑×2瓶,-20℃保存;
粗酶液提?。?/p>
細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測。
測定步驟:
1、分光光度計或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至340nm,蒸餾水調(diào)零。
2、樣本測定
(1)在試劑二中加入10mL試劑一充分溶解混勻,室溫使用渦旋振蕩儀振蕩溶解15min,如未溶解可適當(dāng)延長振蕩時間;置于37℃(哺乳動物)或25℃(其它物種)水浴5min;現(xiàn)配現(xiàn)用(配好后24h內(nèi)用完);
(2)在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL樣本和190μL試劑二,混勻,立即記錄340nm處初始吸光值A(chǔ)1和 5min后的吸光值A(chǔ)2,計算ΔA=A2-A1。