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植物ATP ELISA含量檢測(cè)測(cè)試盒實(shí)驗(yàn)測(cè)定具體步驟:
1.確定本次檢測(cè)所需的已包被抗體的酶標(biāo)板孔數(shù)目,并增加 1 孔作為 TMB 空白顯色孔。 總數(shù)=樣品數(shù)+9;做雙份檢測(cè)時(shí)×2。其余重包裝好放如冰箱中。
2.將標(biāo)準(zhǔn)品各 0.1ml 依次加入一排 7 孔中,1 孔只加樣品稀釋液的作為零孔。對(duì)于血清、體液、 組織勻漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清,直接加已用樣品稀釋液稀釋的樣品 100μ ι 。
3.酶標(biāo)板加上蓋,37℃反應(yīng) 90 分鐘。
4.反應(yīng)后用自動(dòng)洗板機(jī)吸去酶標(biāo)板內(nèi)的液體;或甩去酶標(biāo)板內(nèi)液體,再對(duì)著吸水紙拍幾下。 不洗。
5.將準(zhǔn)備好的生物素抗體工作液按每孔 0.1ml 依次加入。(TMB 空白顯色孔除 外)。37℃反應(yīng) 60 分鐘。
6. 0.01M TBS 或 0.01M PBS 洗滌 3 次,每次浸泡 1 分鐘左右。
7.將準(zhǔn)備好的 ABC 工作液按每孔 0.1ml 依次加入(TMB 空白顯色孔除外)。37℃反應(yīng) 30 分鐘。
8. 0.01M TBS 或 0.01M PBS 洗滌 5 次,每次浸泡 1-2 分鐘左右。
9.按每孔 90μ ι 依次加入已在 37℃平衡 30 分鐘的 TMB 顯色液,37℃避光反應(yīng) 20-25 分鐘 (注意:顯色時(shí)間供參考,因用戶(hù)實(shí)驗(yàn)室條件差異,顯色時(shí)間會(huì)有所不同。此時(shí)肉眼可 見(jiàn)標(biāo)準(zhǔn)品的前 3-4 孔有明顯的梯度藍(lán)色,后 3-4 孔差別不明顯)。
10.按每孔 0.1ml 依次加入 TMB 終止液,此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。
11.用酶標(biāo)儀在 450nm 測(cè)定 OD值。
有兩種設(shè)定空白對(duì)照的方案:
(1)將 TMB 空白顯色孔設(shè)為對(duì)照。所有的標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的吸光值減去 TMB 空白顯色孔的 吸 光 值 后 , 在 坐 標(biāo) 紙 上 畫(huà) 出 曲 線(xiàn) , 以 吸 光 值 作 為 縱 坐 標(biāo) , 以 濃 度 作 為 橫 坐 標(biāo) 。
(2)將零孔設(shè)為對(duì)照。所有的標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的吸光值減去零孔的吸光值后,得到的數(shù)據(jù)可以 直接在坐標(biāo)紙上畫(huà)出曲線(xiàn)。
樣品稀釋的一般原則
用戶(hù)須估計(jì)樣品待測(cè)因子的含量,決定適當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù),以使稀釋后樣品中待測(cè)因子的濃度 處于 ELISA 試劑盒的檢測(cè)范圍。根據(jù)待測(cè)因子含量高、中、低的不同,分別采取不同的稀釋方案:
高:指待測(cè)因子在 20-200ng/ml。一般按 1:100 稀釋。297μ ι 樣品稀釋液加 3μ ι 樣品。
中:指待測(cè)因子在 2-20ng/ml。一般按 1:10 稀釋。225μ ι 樣品稀釋液加 25μ ι 樣品。
低:指待測(cè)因子在 31.2→2000pg/ml。按 1:2 稀釋。100μ ι 樣品稀釋液加 100μ ι 樣品。
特低:指待測(cè)因子≤31.2pg/ml。樣品一般不做稀釋?zhuān)疵靠?100μ ι 樣品直接加入。
以上方案僅供參考,樣品的稀釋?xiě)?yīng)有詳細(xì)記錄。
相關(guān)產(chǎn)品如下:HCMV PP65/HHV5 PP65(Cytomegalovirus PP65 ) 巨細(xì)胞病毒PP65/CMV低基質(zhì)磷脂蛋白抗體 0.2ml 子科ZIKER
HCMV UL49(Human Cytomegalovirus UL49 Gene) 人巨細(xì)胞病毒UL49抗體 0.2ml 子科ZIKER
Rabbit anti-chi IgG/APC 熒光素APC標(biāo)記兔抗雞IgG 0.1ml 子科ZIKER
Rabbit anti-chi IgM/APC 熒光素APC標(biāo)記兔抗雞IgM 0.1ml 子科ZIKER
Rabbit anti-Goat IgG/APC 熒光素APC標(biāo)記兔抗羊IgG 0.1ml 子科ZIKER
Rabbit anti-Goat IgM/APC 熒光素APC標(biāo)記兔抗羊IgM 0.1ml 子科ZIKER
MCP-1/CCL2 (monocyte chemotactic protein1)mouse, rat 單核細(xì)胞趨化蛋白1抗體(大、小鼠) 0.1ml 子科ZIKER
MCP-1/CCL2 (monocyte chemotactic protein1)mouse, rat 單核細(xì)胞趨化蛋白1抗體(大、小鼠) 0.2ml 子科ZIKER
MCP-1/CCL2(Monocyte chemotactic protein 1)human 單核細(xì)胞趨化蛋白1抗體(人) 0.2ml 子科ZIKER
MCP-2/CCL8(Monocyte chemotactic protein 2)human 單核細(xì)胞趨化蛋白2抗體(人) 0.2ml 子科ZIKER
MCP-2/CCL8(Monocyte chemotactic protein 2)rat,mouse 單核細(xì)胞趨化蛋白2抗體(大、小鼠) 0.2ml 子科ZIKER
MCP-3/CCL7(Monocyte chemotactic protein 3)human 單核細(xì)胞趨化蛋白3抗體(人) 0.2ml 子科ZIKER
MCP-3/CCL7(Monocyte chemotactic protein 3)(rat,mouse) 單核細(xì)胞趨化蛋白3抗體(大、小鼠) 0.2ml 子科ZIKER
CCL9/CCL10/MIP-1 gamma(Macrophage inflammatory protein 1-γ) 巨噬細(xì)胞炎癥蛋白-1γ抗體 0.2ml 子科ZIKER
MC-1R (melanocortin-1-receptor) 黑皮質(zhì)素-1受體抗體 0.2ml 子科ZIKER
MCT1(monocarboxylate transporter 1) 單羧酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白-1抗體 0.2ml 子科ZIKER
Rabbit anti-mouse IgM/APC 熒光素APC標(biāo)記兔抗小鼠IgM 0.1ml 子科ZIKER
Rabbit anti-horse IgG/APC 熒光素APC標(biāo)記兔抗馬IgG 0.1ml 子科ZIKER
MCM2(minichromosome maintenance protein 2) 微小染色體維持缺陷蛋白2抗體 0.2ml 子科ZIKER
MCM3(minichromosome maintenance deficient 3) 微小染色體維持缺陷蛋白3抗體 0.2ml 子科ZIKER
MCM7(minichromosome maintenance protein 7) 微小染色體維持缺陷蛋白7抗體 0.2ml 子科ZIKER
M-CSF (Macrophage Colony Stimulating Factors) 巨噬細(xì)胞克隆刺激因子抗體 0.1ml 子科ZIKER
M-CSF (Macrophage Colony Stimulating Factors) 巨噬細(xì)胞克隆刺激因子抗體 0.2ml 子科ZIKER
Mcl-1(myeloid cell leukemia 1) 髓樣細(xì)胞白血病-1抗體 0.2ml 子科ZIKER
MDM2 (urine double minute 2) 雙微體2癌基因抗體 0.1ml 子科ZIKER
MDM2 (urine double minute 2) 雙微體2癌基因抗體 0.2ml 子科ZIKER
StreptavidiPC 熒光素APC標(biāo)記鏈霉親和素 0.1ml 子科ZIKER
rec Protein A/APC 熒光素APC標(biāo)記重組純化蛋白A 0.1ml 子科ZIKER
MDR1(multidrug resistance 1) 多藥耐藥蛋白抗體 0.1ml 子科ZIKER
MDR1(multidrug resistance 1) 多藥耐藥蛋白抗體 0.2ml 子科ZIKER
MEF2(myocyte enhancer-binding factor 2) 肌細(xì)胞增強(qiáng)因子2抗體 0.2ml 子科ZIKER
Melamine 三聚氰胺抗體 0.2ml 子科ZIKER
Melan-A/MART-1 黑色素瘤相關(guān)抗原/黑色素-A抗體 0.2ml 子科ZIKER
MEK1/MAPKK1/MEKK1(mitogen activated protein kinase kinase 1) MEK1/MAPKK1抗體(N-端) 0.2ml 子科ZIKER
Menin/Men1 Menin抑癌蛋白抗體 0.2ml 子科ZIKER
Metal ion transporter 擬南介金屬離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白抗體 0.2ml 子科ZIKER
Mfn1 (Mitofusin1) 線(xiàn)粒體融合蛋白1抗體 0.2ml 子科ZIKER