產品名稱：人糖磷脂酰肌醇(GPI)ELISA 試劑盒

：135 64515386    

產品規(guī)格：48T/96T

ELISA試劑盒說明書

Elisa試驗在實驗室中比較常見，那么elisa實驗具體步驟怎么做，有沒有比較詳細的elisa試劑盒說明書呢？

  Elisa試劑盒說明書如下：

  ELISA試劑盒說明書1:用于檢測未知抗原的雙抗體夾心法: 

  1.包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質含量為1～10靏／ml。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml，4℃ 過夜。次日，棄去孔內溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。（簡稱洗滌，下同）。

  2.加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中，置37℃ 孵育1小時。然后洗滌。（同時做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔）。

  3.加酶標抗體：于各反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標抗體（經滴定后的稀釋度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小時，洗滌。

  4.加底物液顯色：于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。   5.終止反應：于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。

  6.結果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結果：反應孔內顏色越深，陽性程度越強，陰性反應為無色或極淺，依據所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對照孔調零后測各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。   ELISA試劑盒說明書二：用于檢測未知抗體的間接法：

  1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10靏／ml，每孔加0.1ml，4℃過夜。次日洗滌3次。   2.加一定稀釋的待檢樣品（未知抗體）0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時,洗滌。（同時做空白、陰性及陽性孔對照）

  3.于反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標第二抗體（抗抗體）0.1ml，37℃孵育30-60分鐘，洗滌,zui后一遍用DDW洗滌。

  4.于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘   5.于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml 

  6.可于白色背景上，直接用肉眼觀察結果：反應孔內顏色越深，陽性程度越強，陰性反應為無色或極淺，依據所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對照孔調零后測各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。

  ELISA 是一種敏感性高、特異性強、重復性好的實驗診斷方法，由于其試劑穩(wěn)定、易保存、操作簡便、結果判斷較客觀等因素，以及既適宜于大規(guī)模篩查試驗又可以用于少量標本的檢測，既可以做定性試驗也可以做定量分析等優(yōu)點，已廣泛應用于微生物學、寄生蟲學、腫瘤學和細胞因子等領域

人凋亡相關因子(FAS/CD95)ELISA試劑盒間接法簡單操作步驟：

　?。?/span>1）、將特異性抗原與固相載體聯結，形成固相抗原；

　　（2）、加稀釋的受檢血清，保溫反應。血清中的特異抗體與固相抗原結合，形成固相抗原抗-體復合物；

　?。?/span>3）、加酶標抗抗體；

　?。?/span>4）、加入酶促反應底物，發(fā)生顯色反應，顯色的深淺與待測抗體的量成正比。

人糖磷脂酰肌醇(GPI)ELISA 試劑盒操作技術相關的注意事項：

•  (FAS/CD95)ELISA試劑盒說明書進行操作。操作前將試劑在室溫下平衡30～60min。

　　⑵ 加樣后及時放人孵箱。標本較多時，要分批操作。按說明步驟嚴格控制操作時間，防止孵育時間人為延長，導致非特異性結合緊附于反應孔周圍，難以清洗*。

　　(3)封板溫育時，各孔一定要封嚴，防止陽性標本的液體蒸發(fā)，產生周邊現象從而導致“花板”的出現。

　　(4)用洗板機洗板時，保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干：還要防止針口有纖維蛋白或異物，這些異物在洗板的過程中易產生拖帶現象而導致“花板”的出現。

　　(5)合理安排檢測量，以免反應板過多造成洗板等待時間長。

　　(6)加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。

　　(7)顯色劑盡量在臨用前配制，堅持不用過期顯色劑，肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用。

　　(8)加樣時保持顯色劑不外流;A、B液應避免接觸金屬器械。加終止液時應避免產生氣泡。

    (9)應保證C清潔，整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸。以上的措施可以使“花板”降至限度。從而提高檢測的特異性。并得到更準確、可靠的實驗結果。

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人糖磷脂酰肌醇(GPI)ELISA 試劑盒  所生產銷售的各種ELISA試劑盒均采用的是定量夾心酶聯免疫技術。抗體具體為FGF6已經被預先涂到微孔板。標準和樣品吸入井和任何FGF6目前被綁定的固定化抗體。*共軛的抗體特異性FGF6除去任何未結合的物質后，加入到孔中?？?蛋白共軛的辣根過氧化物酶（HRP）的洗滌后，加入到孔中。經過洗滌，以除去任何未結合的抗*蛋白的酶試劑，底物溶液加入到孔中，顯色成比例的量的初始步驟中的約束的FGF6。彩色顯影被停止并測量的顏色的強度。

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人糖磷脂酰肌醇(GPI)ELISA 試劑盒如何鑒別不正規(guī)偽劣ELISA試劑盒

隨著生命科學技術的高速發(fā)展，生物公司如雨后春筍一般紛紛涌現，各類生物試劑產品大大方便了科研工作者的工作。無疑，健康有序的生物試劑產業(yè)環(huán)境和秩序對于整個行業(yè)的健康發(fā)展有著舉足輕重的作用。然而，近來許多客戶向我們反映一些唯利是圖的公司和小作坊，用不正規(guī)偽劣的ELISA試劑盒坑害廣大的科研工作者，他們往往唯利是圖，無視科學研究的嚴謹性和嚴肅性，讓廣大的科研工作者被動造假，嚴重擾亂了科研工作，嚴重擾亂了市場秩序，所以我們有義務，有責任揭露這些作偽造假者制作不正規(guī)偽劣ELISA試劑盒的手法，同時提供如何鑒別這些不正規(guī)偽劣ELISA試劑盒的方法，供廣大的科研工作者和用戶參考，讓那些掛羊頭賣狗肉，冒牌進口試劑，以及全無誠信，作假造偽者，如過街之鼠，人人喊打。

造假一：在國外注冊公司，國內生產，隱瞞生產產地，明明是國產試劑卻宣稱國外進口虛報高價，欺騙廣大用戶。

鑒別方法：將“廠家名”、“ELISA”和“假貨”關鍵詞在google上搜索，各類論壇的用戶會將該ELISA試劑盒的質量和效果，是否偽劣一一有所討論。 造假二：仿冒進口ELISA試劑盒，使得進口分裝ELISA質量參差不齊，魚龍混雜，很多都是經小作坊粗劣加工而成，這樣的試劑盒偶爾可以僥幸做出結果，如果做不出來，所購買的公司又沒有完善的售后服務，往往對客戶的問題推三阻四，推脫責任，zui后還是消費者吃虧。

鑒別方法：直接打給生產廠商，詢問他們試劑盒抗原和抗體的來源，索要試劑盒說明書，然后利用網絡確認這些信息，正規(guī)的ELISA生產商，這些信息都是非常齊全，如果信息不全，則該ELISA的制造水平和質量都會很差。  造假三：某些不正規(guī)廠家為了夸大其生產ELISA涵蓋的指標的范圍，用一種指標來冒充其它指標，造成各種種屬、各種指標都可以做的假象。比如用TGFβ這樣的指標代替大多數試劑盒的其他指標作為檢測抗體，同樣可以獲得良好的標準曲線。因為TGFβ在大多數哺乳類動物中（人、大鼠、小鼠、豬、牛„„）都有廣泛表達，種屬間抗原的氨基酸序列同源性達*，TGFβ隨著其他因子的影響，其表達水平也會發(fā)生相應的變化，一般客戶很難察覺，因此這樣的惡性造假行為使得消費者被動造假，后果極其嚴重，因此善意提醒客戶警惕此類作假試劑