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上海莼試生物技術(shù)有限公司
主營(yíng)產(chǎn)品： ELISA試劑盒,ELISA試劑盒價(jià)格，ELISA試劑盒報(bào)價(jià) |
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公司信息
- 聯(lián)系人：
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- 地址：
- 上海市嘉定區(qū)嘉羅公路1661號(hào)
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| 參考價(jià) | 面議 |
- 型號(hào) 48T
- 品牌 其他品牌
- 廠商性質(zhì) 經(jīng)銷商
- 所在地 上海市
更新時(shí)間：2021-07-16 11:18:29瀏覽次數(shù)：410
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參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：副豬嗜血桿菌（HPS）PCR檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品貨號(hào)：CP100177
產(chǎn)品規(guī)格：48T
產(chǎn)品分類：
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存：-20℃保存
產(chǎn)品有效期：一年
產(chǎn)品特點(diǎn)：本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產(chǎn)品。
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:
循環(huán)步驟 | 溫度 | 時(shí)間 | 循環(huán)數(shù) |
預(yù)變性 | 94℃ | 5 min | 1 |
變性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
退火 | 50-65℃ | 20 sec | 30-40 |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | 30-40 |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
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二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1（10pM） 2μl
引物2（10PM） 2μl
Taq酶（2U/μl） 1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：
1）RT-PCR可以檢測(cè)組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號(hào)；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括定量和相對(duì)定量）和定性分析。
主要服務(wù)：DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR。
鏈格孢菌CD3抗體Human MT-CO1(Cytochrome c oxidase subunit 1) ELISA Kit人抗染色體抗體(anti-chromosome Ab)免疫試劑盒
枯草芽孢桿菌CP2相關(guān)轉(zhuǎn)錄抑制因子1抗體Human LAMB1(Laminin subunit beta-1) ELISA Kit人抗縮酶(ALD)自身抗體免疫試劑盒
膠孢電壓依賴型N型鈣通道α1B抗體Human FBN2(Fibrillin-2) ELISA Kit人抗鞘磷脂抗體(IgM)免疫試劑盒
科貝特氏菌屬煙堿型乙酰受體A2(神經(jīng)型)抗體Human TGFBR1(TGF-beta receptor type-1) ELISA Kit人抗鞘磷脂抗體(IgG) 免疫試劑盒
魯氏毛霉C型凝集素結(jié)構(gòu)域家族1成員A抗體Human PRKCE(Protein kinase C epsilon type) ELISA Kit人抗鞘磷脂抗體(IgA)免疫試劑盒
蜂房類芽孢桿菌γ干擾素誘導(dǎo)單核因子抗體Human PRKCG(Protein kinase C gamma type) ELISA Kit人抗浦肯野抗體/抗Yo抗體(PCA-1/Yo)免疫試劑盒
邊緣無漿體（隆德株）血小板因子4抗體Human NRGN(Neurogranin) ELISA Kit人抗平滑肌抗體(ASMA)免疫試劑盒
球孢白僵菌血小板趨化因子7蛋白抗體Human IFITM10(Interferon-induced transmembrane protein 10) ELISA Kit人抗皮膚抗體(ASA)免疫試劑盒
缺陷短波單胞菌干擾素誘導(dǎo)T趨化因子抗體Human IL2RG(Cytokine receptor common subunit gamma) ELISA Kit人抗旁瘤抗原Ma2(PNMA2)抗體免疫試劑盒
金針菇B-淋巴趨化因子抗體Human DSG3(Desmoglein-3) ELISA Kit人抗凝脂(PL)抗體(IgM)免疫試劑盒
黑腐病黃色單胞菌凋亡加強(qiáng)結(jié)構(gòu)域蛋白12抗體Human NOX1(NADPH oxidase 1) ELISA Kit人抗凝脂(PL)抗體(IgG)免疫試劑盒
冷水金黃桿菌凋亡加強(qiáng)結(jié)構(gòu)域蛋白14抗體Human LAD1(Ladinin-1) ELISA Kit人抗凝血素抗體(aPT1/aPT2)免疫試劑盒
黑曲霉肌酸激酶M型抗體Human ITGA5(Integrin alpha-5) ELISA Kit人抗-磷脂酰復(fù)合物(RTH-PS)抗體免疫試劑盒
擬盤多毛孢屬NK受體BY55抗體Human XBP1(X-box-binding protein 1) ELISA Kit人抗III(AT III)免疫試劑盒
紅菇CD229抗體Human DKK2(Dickkopf-related protein 2) ELISA Kit人抗Ⅲ抗體免疫試劑盒
Pseudomonas guariconensis 凝集胎盤蛋白1抗體Human C19orf10(UPF0556 protein C19orf10) ELISA Kit人抗釀酒酵母抗體(IgG)免疫試劑盒
副豬嗜血桿菌（HPS）PCR檢測(cè)試劑盒小孢根霉華變種Rhizopus│microsporus var. chinensis 質(zhì)量規(guī)格：>98%雌酮試劑盒青陽(yáng)參苷元
鏈霉菌Streptomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格：AR,>98%雌三試劑盒蕎麥堿
麥角菌Claviceps│purpurea 質(zhì)量規(guī)格：>98%，BC雌激素誘導(dǎo)蛋白PS2 elisa試劑盒七葉皂苷
美國(guó)大鐘菇Agricarius│bisporus (Lange) Imbach 質(zhì)量規(guī)格：>98%，BR雌激素受體β試劑盒米那普侖鹽酸鹽
果生鏈核盤菌Monilinia│fructigena Honey 質(zhì)量規(guī)格：85~90%，BR雌激素硫酸轉(zhuǎn)移酶試劑盒迷迭香精油
栗酒裂殖酵母Schizosaccharomyces│pombe 質(zhì)量規(guī)格：88~92%，USP雌激素試劑盒萊菔素
多孢木霉Trichoderma│polysporum 質(zhì)量規(guī)格：> 98%,AR雌二受體試劑盒苦味素
枯草芽孢桿菌Bacillus│subtilis 質(zhì)量規(guī)格：Ind Grade雌二試劑盒糠酸
糙皮側(cè)耳(平菇)Pleurotus│ostreatus 質(zhì)量規(guī)格：>98%,分子生物學(xué)級(jí)垂體腺苷酸環(huán)化酶激活肽試劑盒卡維丁
使用方法：
一、樣品DNA的制備
用自選方法提取細(xì)菌樣品DNA。注意：DNA純化方法是決定檢測(cè)靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品DNA，后面的PCR再靈敏也不能提高整體檢測(cè)靈敏度。
二、制備O157:H7標(biāo)準(zhǔn)曲線（以10-10E6這6個(gè)10倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽(yáng)性對(duì)照，只提供沒有傳染性的、可以直接使用的DNA片段作為陽(yáng)性對(duì)照。
1. 標(biāo)記6個(gè)離心管，分別為6，5，4，3，2和1號(hào)。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL超純水（用帶芯槍頭，下同）。
3. 先將本試劑盒提供的陽(yáng)性對(duì)照用TE緩沖液或超純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL（注：請(qǐng)不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至10E7拷貝/μL，建議每次稀釋10倍，梯度稀釋至10E7拷貝/μL）。
4. 在6號(hào)管中加入5 μL 10E7拷貝/μL的O157:H7陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得10E6拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照。
5. 換槍頭，從6號(hào)管中取5 μL溶液到5號(hào)管中，充分震蕩1分鐘，得10E5拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照。
6. 換槍頭，從5號(hào)管中取5 μL溶液到4號(hào)管中，重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。
7. NC管中不加任何陽(yáng)性對(duì)照。
8. 從1-6號(hào)管中分別取5 μL和待測(cè)樣品一起進(jìn)行定量PCR（見下步），每個(gè)樣品做3次重復(fù)。PCR后得到每個(gè)陽(yáng)性對(duì)照稀釋樣品的熒光PCR Ct值，并以之為縱軸，以濃度的對(duì)數(shù)值為橫軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
