上海莼試生物技術(shù)有限公司
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更新時(shí)間:2017-06-08 11:50:41瀏覽次數(shù):458
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細(xì)胞名稱 EB病毒感染的人外周淋巴細(xì)胞;JVM-2
形態(tài)特性 淋巴母細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性 懸浮生長(zhǎng)
特征特性 該細(xì)胞是 J.V.Melo從一位63歲患有套細(xì)胞淋巴瘤白人女性外周血中分離建立的,經(jīng)EBV介導(dǎo)獲得永生化,該細(xì)胞表達(dá)p16和細(xì)胞周期蛋白D2,低水平表達(dá)細(xì)胞周期蛋白D1?!?nbsp;
培養(yǎng)條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS
傳代方法 1:3傳代,2-3天傳一代
傳代情況 C10
凍存條件 70% growth medium; 20% FBS; 10% DMSO
支原體檢測(cè) 陰性
STR STR鑒定
同工酶
染色體
使用權(quán)限 A類 EB病毒感染的人外周淋巴細(xì)胞;JVM-2實(shí)驗(yàn)方法和步驟
(一) 前處理 用臺(tái)稱稱量青蛙或蟾蜍的體重,然后按10微克/克動(dòng)物體重的劑量,腹腔注射秋水仙素。
(二) 取材 注射4小時(shí)后,將動(dòng)物處死,用剪刀剪開皮膚和肌肉,取出大腿骨和脛骨,剔凈股骨上的肌肉,然后用一小塊紗布來回搓干凈。剪開兩端股骨,用注射器(內(nèi)裝5ml 1% 檸檬酸鈉溶液)緩慢沖洗骨髓細(xì)胞到離心管中,經(jīng)平衡后離心8分鐘,速度為1000轉(zhuǎn)/分鐘。
(三) 低滲 吸去上清液,留沉淀物0.2ml,加0.046M KCL 溶液至8 ml 刻度,用吸管沖勻沉淀物,在恒溫水浴(28℃)處理20分鐘或更長(zhǎng)一點(diǎn)時(shí)間。
(四) 固定 低滲后,以每分鐘1000轉(zhuǎn)速度離心10分鐘。用吸管小心吸去上清液,留0.2ml沉淀物,沖散后沿管壁慢慢加入6ml固定液。 沖勻后靜止固定20分鐘。重復(fù)固定1~2次,離心的速度與時(shí)間以上述相同。
(五) 滴片 吸去上清液,留0.2ml沉淀物,加4滴新配的固定液,沖勻沉淀物。從冰箱取出預(yù)先冷凍的載片,每片滴3滴細(xì)胞懸液,立即用嘴向載片上吹氣,使細(xì)胞均勻分散,在酒精燈火焰上來回烤一下,以助染色體更好分散和展開。 (六) 染色 用10:1 Giemsa染液染色20分鐘(Giemsa原液用PH=6.8磷酸緩沖液稀釋),然后用水沖洗,片干后鏡檢。 (七) 鏡檢 在中倍鏡下找染色體分散好的中期分裂相,轉(zhuǎn)至高倍鏡詳細(xì)觀察兩棲類染色體的數(shù)目,屬于大、中、小染色體各有多少條。
注意事項(xiàng):
1.收到細(xì)胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請(qǐng)立即與我們。
2.收到細(xì)胞先不開瓶蓋,瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)(視細(xì)胞密度而定)穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收細(xì)胞時(shí)就整體外觀拍一張照片,觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,隨后在顯微鏡下拍下細(xì)胞狀態(tài),100*,200*各一張),觀察記錄細(xì)胞在運(yùn)輸過程中是否有污染情況。作為我方進(jìn)行銷售依據(jù)。
3.由于細(xì)胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運(yùn)輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊懀时竟局槐WC客戶收到細(xì)胞后一周內(nèi)的細(xì)胞狀態(tài),故客戶需要售后時(shí)需出示收到細(xì)胞的時(shí)間證明及客戶提供收貨時(shí)間和發(fā)現(xiàn)問題后客服人員溝通的時(shí)間證明,期間間隔時(shí)間不能大于7天。
4.所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作,并請(qǐng)注意防護(hù),所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
A260/A280:………………>1.7
用途及描述:科研試劑,雜交液
中文名稱:EZ-Block A in PBS Solution
英文名字:EZ-Block A in PBS Solution
特點(diǎn):
Adantages:(1) Lower background; (2) High sensitiity and specificity, simple procedure. Incubate the membranes in the BIO-BLOCK solution (about 2 ml/cm2) of membrane at 37°C for 15~30 minutes and rinse.
說明:
(Membrane Blocking Agent in 1x PBS), 0.5% Hammarsten Casein in 1 x PBS.A blocking buffer optimized for blocking non-specific binding sites on positiely charged nylon or PDF membranes in nucleic acids or protein blotting applications.
用途及描述:科研試劑,Western Blot與ELISA
中文名稱:EZ-Buffers L HRP(辣根過氧化物酶) Buffer
英文名字:EZ-Buffers L HRP(Horseradish Peroxidaes) Buffer
用途及描述:科研試劑,Western Blot與ELISA
儲(chǔ)存條件: 18~25°C
中文名稱:GST 5 ml(預(yù)裝重力柱)
英文名字:GST-Sefinose 5 ml(Pre-Packed Graity Column)
特點(diǎn):
1. Soluble recombinant protein with GST tag for the separation and purification, dissoled in high concentrations of denaturant inclusion body proteins can not be purified using this medium; specificity, the GST fusion protein with high affinity from bacterial brokenliquid step affinity purification can be obtained in a purity of more than 95% of the target protein; 3 on the medium-bound GST fusion protein, the solution of high concentrations of reduced glutathione (GSH) (33 mM) competition sexualelution. Different GST fusion protein is no need to fumble best of GSH elution concentration, make medium use more simple; 4. Renewable, and repeated use.
簡(jiǎn)介:
日本血吸蟲來源的-S-轉(zhuǎn)移酶(GST)是基工程重組蛋白設(shè)計(jì)和表達(dá)過程中一種常用的融合標(biāo)簽。重組蛋白與GST融合后, 不僅穩(wěn)定性提高、可溶性增強(qiáng), 而且為下游的分離純化帶來了地方便。GST分子量約為26 kDa, 與還原型(GSH)有*的親和力, 此可以利用固定化的GSH實(shí)現(xiàn)對(duì)GST融合蛋白的一步親和純化。 基質(zhì):高度交聯(lián)4%瓊脂糖; Aerage particle size:40~130 μm; pH Stability(工作):3~12。
用途及描述:科研試劑,蛋白純化與層析
儲(chǔ)存條件: 2~8°C
中文名稱:IMDM培養(yǎng)基
英文名字:IMDM medium
組分:
3.0 g/L,25 mM HEPES,2 mML-丙氨酰-
說明:
支持B-淋巴細(xì)胞、T-淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞的原祖細(xì)胞及絕大多數(shù)雜交細(xì)胞的體外培養(yǎng)。CO2濃度:8.5%;pH值:7.0~7.5; 滲透壓:274~302 mOsmol/kg;內(nèi)毒素:<0.005 EU/L;無菌:已檢測(cè)。
用途及描述:科研試劑,細(xì)胞培養(yǎng)基
儲(chǔ)存條件: 2~8°C
中文名稱:L-氨基酸氧化酶
英文名字:L-Amino acid oxidase >4 U/mg
簡(jiǎn)介:
Crotalus adamanteus enom. Supplied as an aqueous solution with toluene added as a preseratie. The presence of substrate and absence of oxygen stabilize the enzyme at eleated temperatures. The enzyme may be reersibly inactiated by incubation at 38°C
用途及描述:科研試劑
儲(chǔ)存條件: 2~8°C
中文名稱:LB Lennox capsules
英文名字:LB Lennox- capsules
分子式: 分子量:
物理性狀及指標(biāo):
組分:………………………胰蛋白胨:10.0 g,酵母浸膏:5.0 g,NaCl:5.0 g
用途及描述:科研試劑,廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué)。用于大腸桿菌的生存和增殖實(shí)驗(yàn)
儲(chǔ)存條件:18~25°C,避光防潮密閉干燥。
中文名稱:STET buffer
英文名字:STET buffer
物理性狀及指標(biāo):
組分:100 mM氯化鈉;10 mM Tris-HCL;1 mM EDTA; 5% Triton X-100
英文名字:DNA from salmon sperm