上海莼試生物技術(shù)有限公司
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更新時間:2017-06-08 13:39:26瀏覽次數(shù):435
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細胞名稱 人癌細胞;MDA-MB-231
形態(tài)特性 上皮樣
生長特性 貼壁生長
特征特性 MDA-MB-231是從一名51歲的白人女性癌患者的胸水中分離建立的。該細胞表達表皮生長因子EGF受體、TGF-α受體和WNT7B癌基因。
培養(yǎng)條件 L15: Leibovitz Medium 10%FBS
傳代方法 1:2~1:4傳代;每周2~3次。
傳代情況 C5
凍存條件 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 培養(yǎng)法(-)
STR Amelogenin:X;CSF1PO:12,13;D13S317:13;D16S539:12;D18S51:11,16;D19S433:11,14;D21S11:30,33.2;D2S1338:20,21;D3S1358:16;D5S818:12;D7S820:8,9;D8S1179:13;FGA:22,23;TH01:7,9.3;TPOX:8,9;vWA:15,18;
同工酶
染色體 58~61,有巨核
使用權(quán)限 A類人癌細胞;MDA-MB-231實驗方法和步驟
(一) 前處理 用臺稱稱量青蛙或蟾蜍的體重,然后按10微克/克動物體重的劑量,腹腔注射秋水仙素。
(二) 取材 注射4小時后,將動物處死,用剪刀剪開皮膚和肌肉,取出大腿骨和脛骨,剔凈股骨上的肌肉,然后用一小塊紗布來回搓干凈。剪開兩端股骨,用注射器(內(nèi)裝5ml 1% 檸檬酸鈉溶液)緩慢沖洗骨髓細胞到離心管中,經(jīng)平衡后離心8分鐘,速度為1000轉(zhuǎn)/分鐘。
(三) 低滲 吸去上清液,留沉淀物0.2ml,加0.046M KCL 溶液至8 ml 刻度,用吸管沖勻沉淀物,在恒溫水浴(28℃)處理20分鐘或更長一點時間。
(四) 固定 低滲后,以每分鐘1000轉(zhuǎn)速度離心10分鐘。用吸管小心吸去上清液,留0.2ml沉淀物,沖散后沿管壁慢慢加入6ml固定液。 沖勻后靜止固定20分鐘。重復(fù)固定1~2次,離心的速度與時間以上述相同。
(五) 滴片 吸去上清液,留0.2ml沉淀物,加4滴新配的固定液,沖勻沉淀物。從冰箱取出預(yù)先冷凍的載片,每片滴3滴細胞懸液,立即用嘴向載片上吹氣,使細胞均勻分散,在酒精燈火焰上來回烤一下,以助染色體更好分散和展開。 (六) 染色 用10:1 Giemsa染液染色20分鐘(Giemsa原液用PH=6.8磷酸緩沖液稀釋),然后用水沖洗,片干后鏡檢。 (七) 鏡檢 在中倍鏡下找染色體分散好的中期分裂相,轉(zhuǎn)至高倍鏡詳細觀察兩棲類染色體的數(shù)目,屬于大、中、小染色體各有多少條。
注意事項:
1.收到細胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們。
2.收到細胞先不開瓶蓋,瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時(視細胞密度而定)穩(wěn)定細胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議收細胞時就整體外觀拍一張照片,觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,隨后在顯微鏡下拍下細胞狀態(tài),100*,200*各一張),觀察記錄細胞在運輸過程中是否有污染情況。作為我方進行銷售依據(jù)。
3.由于細胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊?,故本公司只保證客戶收到細胞后一周內(nèi)的細胞狀態(tài),故客戶需要售后時需出示收到細胞的時間證明及客戶提供收貨時間和發(fā)現(xiàn)問題后客服人員溝通的時間證明,期間間隔時間不能大于7天。
4.所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級生物安全臺內(nèi)操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
應(yīng)用:利用分子篩作用,進行緩沖液交換、脫鹽,分離小分子,去除小分子;工業(yè)脫鹽。
性狀:白色微球,多孔
凝膠類型:凝膠過濾填料,親水型凝膠
結(jié)構(gòu)成分:交聯(lián)右旋糖酐
粒徑:細顆粒20-80μm,中顆粒50-150μm,粗顆粒100-300μm
工作PH值:2-13
操作溫度:4-40℃
球蛋白分離范圍:1000-5000
保存條件:4-25℃
中文名稱:葡聚糖凝膠G-200;交聯(lián)葡聚糖G-200
英文名字:Sephadex G-200
應(yīng)用:利用分子篩作用,進行多肽分離、脫鹽、清洗生物提取液、分子量測定
性狀:白色微球,多孔
凝膠類型:凝膠過濾填料,親水型凝膠
結(jié)構(gòu)成分:交聯(lián)右旋糖酐
粒徑:40-120μm
工作PH值:2-10
操作溫度:4-40℃
球蛋白分離范圍:3000-600000
保存條件:4-25℃
中文名稱:葡聚糖凝膠G-150;交聯(lián)葡聚糖G-150
英文名字:Sephadex G-150
應(yīng)用:利用分子篩作用,進行多肽分離、脫鹽、清洗生物提取液、分子量測定
性狀:白色微球,多孔
凝膠類型:凝膠過濾填料,親水型凝膠
結(jié)構(gòu)成分:交聯(lián)右旋糖酐
粒徑:40-120μm
工作PH值:2-10
操作溫度:4-40℃
球蛋白分離范圍:5000-300000
保存條件:4-25℃
中文名稱:葡聚糖凝膠G-100;交聯(lián)葡聚糖G-100
英文名字:Sephadex G-100
應(yīng)用:利用分子篩作用,進行多肽分離、脫鹽、清洗生物提取液、分子量測定
性狀:白色微球,多孔
凝膠類型:凝膠過濾填料,親水型凝膠
結(jié)構(gòu)成分:交聯(lián)右旋糖酐
粒徑: 40-120μm
工作PH值:2-10
操作溫度:4-40℃
球蛋白分離范圍:4000-150000
保存條件:4-25℃
類別: 蛋白質(zhì)Marker
中文名稱:GE低分子量蛋白標(biāo)準(zhǔn)(GE17-0446-01)
英文名字:GE LMW-SDS Marker Kit
描述及應(yīng)用:
通過和標(biāo)準(zhǔn)樣品對比,用PAGE檢測未知樣品蛋白含量。
特點:
根據(jù)遷移距離,可得清晰的條帶。
通過考馬斯亮藍法或銀染法,可得到肉眼可見的蛋白染色條帶。
產(chǎn)品組成:
兔磷酸化酶b(1),67 μg,分子量(Mr) 97 000
牛血清白蛋白(2),83 μg,分子量(Mr) 66 000
雞卵清蛋白(3),147 μg,分子量(Mr) 45 000
牛血碳酸酐酶(4),83 μg,分子量(Mr) 30 000
大豆抑制劑(5),80 μg,分子量(Mr) 20 100
牛奶α-乳白蛋白(6),116 μg, 分子量(Mr) 14 400
分子量檢測范圍:
14-97kDa。
儲存條件:
4℃,密封儲存。
中文名稱:GE中分子量蛋白標(biāo)準(zhǔn)(GE17-0615-01)