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原代細(xì)胞VS細(xì)胞系：

用酶或機(jī)械方法直接從人或動物組織中分離出來的細(xì)胞。嚴(yán)格來說，從機(jī)體分離出來到傳代之前的細(xì)胞稱為原代細(xì)胞，絕大部分的原代細(xì)胞在體外可以分裂10-15次(這與細(xì)胞的端粒長短有關(guān))，再加上取材，成本等因素，通常會把培養(yǎng)的第一代到第十代以內(nèi)的細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)胞。

兔心肌成纖維細(xì)胞

商品屬性：

細(xì)胞簡介：

兔心肌成纖維分離自心臟組織；心臟由心肌細(xì)胞和非心肌細(xì)胞組成，非心肌細(xì)胞占細(xì)胞總數(shù)的70%，其中90%以上的非心肌細(xì)胞由心肌成纖維細(xì)胞組成。成纖維細(xì)胞（Fibroblast）是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分，由胚胎時(shí)期的間充質(zhì)細(xì)胞分化而來。成纖維細(xì)胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu)，其細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細(xì)胞功能活動旺盛，細(xì)胞質(zhì)嗜弱堿性，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動，在一定條件下，它可以實(shí)現(xiàn)跟纖維細(xì)胞的互相轉(zhuǎn)化；成纖維細(xì)胞對不同程度的細(xì)胞變性、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用。剛分離的心肌成纖維細(xì)胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細(xì)胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起；6h后細(xì)胞基本貼壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團(tuán)；細(xì)胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態(tài)，細(xì)胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細(xì)胞質(zhì)透明，細(xì)胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細(xì)胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀；細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。近年來，人們逐漸了解到非心肌細(xì)胞不僅對心肌細(xì)胞具有結(jié)構(gòu)上的支持、保護(hù)作用，而且還具有自分泌和旁分泌功能，影響心肌細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和生理功能；心肌成纖維細(xì)胞主要功能為對心肌細(xì)胞起結(jié)構(gòu)支持作用并負(fù)責(zé)細(xì)胞基質(zhì)外的合成，當(dāng)心肌損傷時(shí)能產(chǎn)生旁分泌生長因子。心肌成纖維細(xì)胞是心臟結(jié)締組織中常見的細(xì)胞，可合成和分泌膠原纖維、彈性纖維、網(wǎng)狀纖維及有機(jī)基質(zhì)，并且在外傷等因素刺激下，部分纖維細(xì)胞可重新轉(zhuǎn)變?yōu)橛字傻某衫w維細(xì)胞，其功能活動也得以恢復(fù)，參與組織損傷后的修復(fù)。因此，對心肌成纖維細(xì)胞的生理學(xué)研究成為現(xiàn)代心血管領(lǐng)域研究的一個重點(diǎn)。

方法簡介：

實(shí)驗(yàn)室分離的兔心肌成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

質(zhì)量檢測：

實(shí)驗(yàn)室分離的兔心肌成纖維采用膠原酶-聯(lián)合消化結(jié)合差速貼壁法制備而來，細(xì)胞總量約為5×105cells/瓶。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣

傳代特性：可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

原代細(xì)胞一般傳至10代左右，大部分細(xì)胞衰老死亡，但是有極少數(shù)的細(xì)胞能夠度過“危機(jī)"而繼續(xù)傳下去，存活的細(xì)胞一般能夠傳到40-50代，叫細(xì)胞株。當(dāng)50代以后又會出現(xiàn)“危機(jī)"，這時(shí)有部分細(xì)胞的遺傳物質(zhì)發(fā)生了改變且?guī)в邪┳兊奶攸c(diǎn)，從而可能無限制地傳代下去，稱為細(xì)胞系。

也有認(rèn)為細(xì)胞系指原代細(xì)胞培養(yǎng)物經(jīng)傳代成功后所繁殖的細(xì)胞群體。也指可長期連續(xù)傳代的培養(yǎng)細(xì)胞。由此便引申出了后來的有限細(xì)胞系、無限細(xì)胞系，因此，細(xì)胞系狹義的是指可連續(xù)傳代的細(xì)胞，廣義是指可傳代的細(xì)胞。而細(xì)胞株是通過選擇法或克隆形成法，從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中獲得具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志物的單一細(xì)胞稱為細(xì)胞株。

細(xì)胞系具有容易培養(yǎng)、種類多、價(jià)格便宜、無限傳代等優(yōu)點(diǎn)，也非常容易在培養(yǎng)、凍存中發(fā)生錯誤鑒定及交叉污染的問題。

公司正在銷售的產(chǎn)品：

小鼠α2纖溶酶抑制物(α2-PI)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat acidic fibroblast growth factor 1 (aFGF-1) ELISA Kit 大鼠酸性成纖維細(xì)胞生長因子1(aFGF-1)ELISA試劑盒

Humanchaperonin10,CPN10ELISAKit 人伴侶蛋白10(CPN10)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Humancirculatingimmunecomplex,CICELISA試劑盒人循環(huán)免疫復(fù)合物(CIC)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

組蛋白H1激酶免疫共沉淀檢測試劑盒10次

Humaudimealbovineserumalbumincheck-upELISAKit人的牛血清白蛋白殘留檢測ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

兔血管生成素2elisa試劑盒   兔血管生成素2試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔血管生成素2試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔血管生成素2試劑盒、兔血管生成素2 elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

兔血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1elisa試劑盒   兔血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1試劑盒、兔血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1 elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

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兔血管緊張素Ⅱelisa試劑盒   兔血管緊張素Ⅱ試劑盒   規(guī)格型號：96T/48T   兔血管緊張素Ⅱ試劑盒，規(guī)格型號：96T/48T，來源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：兔血管緊張素Ⅱ試劑盒、兔血管緊張素Ⅱ elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個月。

大鼠周期素依賴性激酶抑制因子2A(CDKN2A)ELISA試劑盒 ，英文名： CDKN2A ELISA Kit

Mouse ai platelet aibody IgG/M/A (PA-IgG/M/A) ELISA Kit 小鼠抗血小板抗體IgG/M/A(PA-IgG/M/A)ELISA試劑盒

MouseBrainderivedneuroophicfacor,BDNFELISAKit 小鼠腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforHumanisletamyloidpolypeptide,IAPPELISAKit人胰島淀粉樣多肽規(guī)格：48T/96T

微型RNA(miRNA)北方雜交試劑盒5次

ELISAKitMIF大鼠巨噬細(xì)胞移動抑制因子規(guī)格：48T/96T

GFRA3重組小鼠 GFRA3 / GFR-alpha-3 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

肌球蛋白重鏈1(MYH1)重組蛋白 Recombinant Myosin Heavy Chain 1, Skeletal Muscle, Adult (MYH1)

CCL23重組人 CCL23 / MIP 3 蛋白 Protein

HAVCR1 Protein Human 重組人 KIM-1 / TIM1 / HACVR1 蛋白 (His 標(biāo)簽)

IL13RA2 Protein Canine 重組狗 IL13RA2 / IL13R 蛋白 (His 標(biāo)簽)

兔心肌成纖維細(xì)胞肌球蛋白重鏈1(MYH1)重組蛋白 Recombinant Myosin Heavy Chain 1, Skeletal Muscle, Adult (MYH1)

HAVCR1 Protein Human 重組人 KIM-1 / TIM1 / HACVR1 蛋白 (His 標(biāo)簽)

GFRA3重組小鼠 GFRA3 / GFR-alpha-3 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

IL13RA2 Protein Canine 重組狗 IL13RA2 / IL13R 蛋白 (His 標(biāo)簽)

CCL23重組人 CCL23 / MIP 3 蛋白 Protein

原代細(xì)胞培養(yǎng)的具體步驟：

1、準(zhǔn)備：取各種已消毒的培養(yǎng)用品置于凈化臺面，紫外線消毒20分鐘。開始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。

2、布局：點(diǎn)燃酒精燈，安裝吸管帽。

3、處理組織：把組織塊置于燒杯中，用Hanks液漂洗2-3次，去除血污；如懷疑組織可能污染，可先置于含有青的混合液中30-60分鐘。

5、消化：或用恒溫水浴，或置于37℃溫箱消化均可，消化中每隔20分鐘應(yīng)搖動一次，如用電磁恒溫?cái)嚢杵飨?。消化時(shí)間依組織塊的大小和組織的硬度而定。

6、分離：在消化過程中見消化液發(fā)混濁時(shí)，可用吸管吸出少許消化液在鏡下觀察，如組織已分散成細(xì)胞團(tuán)或單個細(xì)胞，立即終止消化，隨即通過適宜不銹鋼篩，濾掉尚未充分消化開的組織塊。低速（500-1000轉(zhuǎn)/分）離心消化液5分鐘，吸出上清，加入適量含有血清的培養(yǎng)液。

7、計(jì)數(shù)：用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，如細(xì)胞懸液細(xì)胞密度過大，再補(bǔ)加培養(yǎng)液調(diào)整后，分裝入培養(yǎng)瓶中。對大多數(shù)細(xì)胞來說，pH要求在7.2-7.4范圍，培養(yǎng)液呈微紅色，如顏色偏黃，說明液體變酸，可用NaHCO3調(diào)整。

8、培養(yǎng)：置于37℃溫箱培養(yǎng)，如用CO2溫箱培養(yǎng)，瓶口需用紗布棉塞或螺旋帽堵塞，紗布塞易生霉菌，每次換液時(shí)需要換新塞。