上海莼試生物技術有限公司
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上海市
更新時間:2024-10-04 13:00:05瀏覽次數:68
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原代細胞VS細胞系:
用酶或機械方法直接從人或動物組織中分離出來的細胞。嚴格來說,從機體分離出來到傳代之前的細胞稱為原代細胞,絕大部分的原代細胞在體外可以分裂10-15次(這與細胞的端粒長短有關),再加上取材,成本等因素,通常會把培養(yǎng)的第一代到第十代以內的細胞統(tǒng)稱為原代細胞。
商品屬性:
組織來源 | 牙胚 | 產品規(guī)格 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 |
產品貨號 | CS-X3829 | 生長特性 | 貼壁 |
細胞簡介:
兔牙胚分離自牙胚組織;牙胚是牙齒開始發(fā)育階段的形態(tài),是由牙板向深層的結締組織內伸延,在其末端細胞增生,進一步發(fā)育成牙胚。牙胚有三部分組成:①成釉器(enamel organ),起源于口腔外胚層,形成釉質;②牙乳頭(dental papilla),起源于外胚層間充質,形成牙髓和牙本質;③牙囊(dental sac),起源于外胚層間充質,形成牙骨質、牙周膜和固有牙槽骨。牙胚的發(fā)生是口腔上皮和外胚間充質相互作用的結果。在胚胎的第5周,覆蓋在原口腔的上皮由兩層細胞組成,外層是扁平上皮細胞,內層為矮柱狀的基底細胞。在未來的牙槽突區(qū),深層的外胚層間充組織誘導上皮增生,開始僅在上下頜弓的特定點上,上皮局部增生,很快增厚的上皮相互連接,依照頜骨的外形形成一馬蹄形上皮帶,稱為原發(fā)性上皮帶。在胚胎的第7周,這一上皮帶繼續(xù)向深層生長,并分裂為兩個:向頰(唇)方向生長的上皮板稱前庭板,位于舌(腭)側的上皮板稱為牙板(dental lamina)。在胚胎的第8-10周,前庭板繼續(xù)向深層生長,與發(fā)育的牙槽嵴分開,前庭板表面上皮變性,形成口腔前庭溝。
方法簡介:
實驗室分離的兔牙胚經檢測,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
質量檢測:
實驗室分離的兔牙胚采用膠原酶消化法制備而來制備而來,細胞總量約為5×105cells/瓶。
培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基:含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長特性:貼壁
細胞形態(tài):梭形、多角形
傳代特性:可傳3代左右
消化液:0.25%
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;CO2,5%
原代細胞一般傳至10代左右,大部分細胞衰老死亡,但是有極少數的細胞能夠度過“危機"而繼續(xù)傳下去,存活的細胞一般能夠傳到40-50代,叫細胞株。當50代以后又會出現“危機",這時有部分細胞的遺傳物質發(fā)生了改變且?guī)в邪┳兊奶攸c,從而可能無限制地傳代下去,稱為細胞系。
也有認為細胞系指原代細胞培養(yǎng)物經傳代成功后所繁殖的細胞群體。也指可長期連續(xù)傳代的培養(yǎng)細胞。由此便引申出了后來的有限細胞系、無限細胞系,因此,細胞系狹義的是指可連續(xù)傳代的細胞,廣義是指可傳代的細胞。而細胞株是通過選擇法或克隆形成法,從原代培養(yǎng)物或細胞系中獲得具有特殊性質或標志物的單一細胞稱為細胞株。
細胞系具有容易培養(yǎng)、種類多、價格便宜、無限傳代等優(yōu)點,也非常容易在培養(yǎng)、凍存中發(fā)生錯誤鑒定及交叉污染的問題。
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原代細胞培養(yǎng)的具體步驟:
1、準備:取各種已消毒的培養(yǎng)用品置于凈化臺面,紫外線消毒20分鐘。開始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。
2、布局:點燃酒精燈,安裝吸管帽。
3、處理組織:把組織塊置于燒杯中,用Hanks液漂洗2-3次,去除血污;如懷疑組織可能污染,可先置于含有青的混合液中30-60分鐘。
5、消化:或用恒溫水浴,或置于37℃溫箱消化均可,消化中每隔20分鐘應搖動一次,如用電磁恒溫攪拌器消化更好。消化時間依組織塊的大小和組織的硬度而定。
6、分離:在消化過程中見消化液發(fā)混濁時,可用吸管吸出少許消化液在鏡下觀察,如組織已分散成細胞團或單個細胞,立即終止消化,隨即通過適宜不銹鋼篩,濾掉尚未充分消化開的組織塊。低速(500-1000轉/分)離心消化液5分鐘,吸出上清,加入適量含有血清的培養(yǎng)液。
7、計數:用計數板計數,如細胞懸液細胞密度過大,再補加培養(yǎng)液調整后,分裝入培養(yǎng)瓶中。對大多數細胞來說,pH要求在7.2-7.4范圍,培養(yǎng)液呈微紅色,如顏色偏黃,說明液體變酸,可用NaHCO3調整。
8、培養(yǎng):置于37℃溫箱培養(yǎng),如用CO2溫箱培養(yǎng),瓶口需用紗布棉塞或螺旋帽堵塞,紗布塞易生霉菌,每次換液時需要換新塞。