上海莼試生物技術(shù)有限公司
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上海市
更新時間:2024-10-04 13:01:08瀏覽次數(shù):62
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原代細胞VS細胞系:
用酶或機械方法直接從人或動物組織中分離出來的細胞。嚴格來說,從機體分離出來到傳代之前的細胞稱為原代細胞,絕大部分的原代細胞在體外可以分裂10-15次(這與細胞的端粒長短有關(guān)),再加上取材,成本等因素,通常會把培養(yǎng)的第一代到第十代以內(nèi)的細胞統(tǒng)稱為原代細胞。
商品屬性:
組織來源 | 牙乳頭 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 |
產(chǎn)品貨號 | CS-X3683 | 生長特性 | 貼壁 |
細胞簡介:
兔牙乳頭分離自牙乳頭組織;牙乳頭細胞來源于外胚間充質(zhì),具有多向分化潛能,是體內(nèi)分化為成牙本質(zhì)細胞的前體細胞,該細胞在牙發(fā)育和牙體牙髓損傷修復(fù)過程中起重要作用。牙乳頭細胞為未分化的間充質(zhì)細胞,有少量微細的膠原纖維分散在細胞外間隙。在鐘狀期,被成釉器凹陷部包圍的外胚間葉組織增多,并出現(xiàn)細胞的分化。在內(nèi)釉上皮的誘導(dǎo)下,牙乳頭外層細胞分化為高柱狀的成牙本質(zhì)細胞。這些細胞在切緣或牙尖部為柱狀,在牙頸部細胞尚未分化成熟,為立方狀。牙乳頭在牙發(fā)育中有重要作用?,F(xiàn)已證明,牙乳頭是決定牙形狀的重要因索。例如,將切牙的成釉器與磨牙的牙乳頭重新組合,結(jié)果形成磨牙;與此相反,切牙的牙乳頭與磨牙成釉器重新組合,結(jié)果形成切牙。牙乳頭還可以誘導(dǎo)非牙源性的口腔上皮形成成釉器。
方法簡介:
實驗室分離的兔牙乳頭經(jīng)DMP免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
質(zhì)量檢測:
實驗室分離的兔牙乳頭采用混合膠原酶消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來,細胞總量約為5×105cells/瓶。
培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基:含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長特性:貼壁
細胞形態(tài):梭形、多角形
傳代特性:可傳1-2代
消化液:0.25%
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;CO2,5%
原代細胞一般傳至10代左右,大部分細胞衰老死亡,但是有極少數(shù)的細胞能夠度過“危機"而繼續(xù)傳下去,存活的細胞一般能夠傳到40-50代,叫細胞株。當50代以后又會出現(xiàn)“危機",這時有部分細胞的遺傳物質(zhì)發(fā)生了改變且?guī)в邪┳兊奶攸c,從而可能無限制地傳代下去,稱為細胞系。
也有認為細胞系指原代細胞培養(yǎng)物經(jīng)傳代成功后所繁殖的細胞群體。也指可長期連續(xù)傳代的培養(yǎng)細胞。由此便引申出了后來的有限細胞系、無限細胞系,因此,細胞系狹義的是指可連續(xù)傳代的細胞,廣義是指可傳代的細胞。而細胞株是通過選擇法或克隆形成法,從原代培養(yǎng)物或細胞系中獲得具有特殊性質(zhì)或標志物的單一細胞稱為細胞株。
細胞系具有容易培養(yǎng)、種類多、價格便宜、無限傳代等優(yōu)點,也非常容易在培養(yǎng)、凍存中發(fā)生錯誤鑒定及交叉污染的問題。
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原代細胞培養(yǎng)的具體步驟:
1、準備:取各種已消毒的培養(yǎng)用品置于凈化臺面,紫外線消毒20分鐘。開始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。
2、布局:點燃酒精燈,安裝吸管帽。
3、處理組織:把組織塊置于燒杯中,用Hanks液漂洗2-3次,去除血污;如懷疑組織可能污染,可先置于含有青的混合液中30-60分鐘。
5、消化:或用恒溫水浴,或置于37℃溫箱消化均可,消化中每隔20分鐘應(yīng)搖動一次,如用電磁恒溫攪拌器消化更好。消化時間依組織塊的大小和組織的硬度而定。
6、分離:在消化過程中見消化液發(fā)混濁時,可用吸管吸出少許消化液在鏡下觀察,如組織已分散成細胞團或單個細胞,立即終止消化,隨即通過適宜不銹鋼篩,濾掉尚未充分消化開的組織塊。低速(500-1000轉(zhuǎn)/分)離心消化液5分鐘,吸出上清,加入適量含有血清的培養(yǎng)液。
7、計數(shù):用計數(shù)板計數(shù),如細胞懸液細胞密度過大,再補加培養(yǎng)液調(diào)整后,分裝入培養(yǎng)瓶中。對大多數(shù)細胞來說,pH要求在7.2-7.4范圍,培養(yǎng)液呈微紅色,如顏色偏黃,說明液體變酸,可用NaHCO3調(diào)整。
8、培養(yǎng):置于37℃溫箱培養(yǎng),如用CO2溫箱培養(yǎng),瓶口需用紗布棉塞或螺旋帽堵塞,紗布塞易生霉菌,每次換液時需要換新塞。