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原代細胞VS細胞系：

用酶或機械方法直接從人或動物組織中分離出來的細胞。嚴格來說，從機體分離出來到傳代之前的細胞稱為原代細胞，絕大部分的原代細胞在體外可以分裂10-15次(這與細胞的端粒長短有關(guān))，再加上取材，成本等因素，通常會把培養(yǎng)的第一代到第十代以內(nèi)的細胞統(tǒng)稱為原代細胞。

?兔滋養(yǎng)層干細胞

商品屬性：

細胞簡介：

兔滋養(yǎng)層干分離自胎盤組織；胎盤（placenta）是哺乳動物妊娠期間由胚胎的胚膜和母體子宮內(nèi)膜聯(lián)合長成的母子間交換物質(zhì)的過渡性器官，由羊膜、葉狀絨毛膜和底蛻膜構(gòu)成。胎兒在子宮中發(fā)育，依靠胎盤從母體取得營養(yǎng)，而雙方保持相當?shù)莫毩⑿?。胎盤還產(chǎn)生多種維持妊娠的激素，是一個重要的內(nèi)分泌器官。有些爬行類和魚類也以胎生方式繁殖后代，胚胎生長出一些輔助結(jié)構(gòu)如卵黃囊、鰓絲等與母體組織緊密結(jié)合，以達到母子間物質(zhì)的交換，這樣的結(jié)構(gòu)稱假胎盤。滋養(yǎng)層干細胞是胎盤組織細胞的祖細胞，與胚胎著床和胎盤的形成密切相關(guān)。胚胎著床和胎盤形成是母體與胎兒建立聯(lián)系的關(guān)鍵時期，此時期滋養(yǎng)層細胞增殖速度快，滋養(yǎng)層干細胞自我更新和分化旺盛，與多種妊娠相關(guān)疾病的發(fā)生、發(fā)展及其增殖、功能調(diào)節(jié)的失常有密切關(guān)系。在哺乳動物胚胎發(fā)育過程中，胚胎細胞次分化形成內(nèi)細胞團和滋養(yǎng)外胚層。滋養(yǎng)層干細胞是胎盤細胞的前體細胞，在胎盤發(fā)育中有重要作用。

方法簡介：

實驗室分離的兔滋養(yǎng)層干經(jīng)HLA-E(白細胞抗原)免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

質(zhì)量檢測：

實驗室分離的兔滋養(yǎng)層干采用囊胚組織貼壁法制備而來，細胞總量約為5×105cells/瓶。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態(tài)：成纖維細胞樣

傳代特性：可傳3代左右

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

原代細胞一般傳至10代左右，大部分細胞衰老死亡，但是有極少數(shù)的細胞能夠度過“危機"而繼續(xù)傳下去，存活的細胞一般能夠傳到40-50代，叫細胞株。當50代以后又會出現(xiàn)“危機"，這時有部分細胞的遺傳物質(zhì)發(fā)生了改變且?guī)в邪┳兊奶攸c，從而可能無限制地傳代下去，稱為細胞系。

也有認為細胞系指原代細胞培養(yǎng)物經(jīng)傳代成功后所繁殖的細胞群體。也指可長期連續(xù)傳代的培養(yǎng)細胞。由此便引申出了后來的有限細胞系、無限細胞系，因此，細胞系狹義的是指可連續(xù)傳代的細胞，廣義是指可傳代的細胞。而細胞株是通過選擇法或克隆形成法，從原代培養(yǎng)物或細胞系中獲得具有特殊性質(zhì)或標志物的單一細胞稱為細胞株。

細胞系具有容易培養(yǎng)、種類多、價格便宜、無限傳代等優(yōu)點，也非常容易在培養(yǎng)、凍存中發(fā)生錯誤鑒定及交叉污染的問題。

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白蛋白(ALB)天然蛋白 Native Albumin (ALB)

B3GNT2重組人 B3GNT2 蛋白 (Fc 標簽) Protein

IGJ Protein Human 重組人 IGJ / Immunoglobulin J chain 蛋白 (His 標簽)

IFNA1 Protein Rat 重組大鼠 IFN-alpha / IFNA1 / IFN 蛋白 (Fc 標簽)

兔滋養(yǎng)層干細胞端粒酶關(guān)聯(lián)蛋白1(TEP1)重組蛋白 Recombinant Telomerase Associated Protein 1 (TEP1)

IGJ Protein Human 重組人 IGJ / Immunoglobulin J chain 蛋白 (His 標簽)

S100B重組小鼠 S100B / S100beta 蛋白 (Fc 標簽) Protein

IL17RA Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 IL17RA / IL17R 蛋白 (Fc 標簽)

DDR2重組人 DDR2 Kinase / CD167b 蛋白 (His 標簽) Protein

原代細胞培養(yǎng)的具體步驟：

1、準備：取各種已消毒的培養(yǎng)用品置于凈化臺面，紫外線消毒20分鐘。開始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。

2、布局：點燃酒精燈，安裝吸管帽。

3、處理組織：把組織塊置于燒杯中，用Hanks液漂洗2-3次，去除血污；如懷疑組織可能污染，可先置于含有青的混合液中30-60分鐘。

5、消化：或用恒溫水浴，或置于37℃溫箱消化均可，消化中每隔20分鐘應搖動一次，如用電磁恒溫攪拌器消化更好。消化時間依組織塊的大小和組織的硬度而定。

6、分離：在消化過程中見消化液發(fā)混濁時，可用吸管吸出少許消化液在鏡下觀察，如組織已分散成細胞團或單個細胞，立即終止消化，隨即通過適宜不銹鋼篩，濾掉尚未充分消化開的組織塊。低速（500-1000轉(zhuǎn)/分）離心消化液5分鐘，吸出上清，加入適量含有血清的培養(yǎng)液。

7、計數(shù)：用計數(shù)板計數(shù)，如細胞懸液細胞密度過大，再補加培養(yǎng)液調(diào)整后，分裝入培養(yǎng)瓶中。對大多數(shù)細胞來說，pH要求在7.2-7.4范圍，培養(yǎng)液呈微紅色，如顏色偏黃，說明液體變酸，可用NaHCO3調(diào)整。

8、培養(yǎng)：置于37℃溫箱培養(yǎng)，如用CO2溫箱培養(yǎng)，瓶口需用紗布棉塞或螺旋帽堵塞，紗布塞易生霉菌，每次換液時需要換新塞。