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上海博湖生物科技有限公司
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細(xì)胞凍存詳細(xì)說明
2024-10-28 閱讀(29)
隨著實驗室細(xì)胞培養(yǎng)的發(fā)展，除了原代培養(yǎng)之外，人工開發(fā)出來的細(xì)胞系的保存越重要。冷凍保存細(xì)胞系的優(yōu)點如下：
1、減少基因漂移；
2、減緩細(xì)胞系的衰老；
3、穩(wěn)定表型；
4、減少微生物污染及交叉污染機(jī)會等。細(xì)胞冷凍的原理在于盡可能降低細(xì)胞內(nèi)的晶體形成，減少細(xì)胞內(nèi)水凝固所形成的高濃度溶質(zhì)對細(xì)胞造成的低溫?fù)p傷，從提高細(xì)胞復(fù)蘇時的存活率。細(xì)胞凍存的數(shù)量應(yīng)保證復(fù)蘇時低溫保護(hù)劑獲稀釋，稀釋后的細(xì)胞濃度扔高于正常傳代的細(xì)胞濃度為宜，這是因為當(dāng)?shù)蜏乇Ｗo(hù)劑稀釋以后，該濃度一般不會對細(xì)胞造成毒性損傷。通用細(xì)胞凍存液主要由FBS、DMSO等組成，是非常經(jīng)典的一種無菌凍存液。用于各種哺乳動物原代細(xì)胞、傳代細(xì)胞系、雜交瘤細(xì)胞等的凍存。
操作步驟：
1、培養(yǎng)細(xì)胞至對數(shù)生長晚起，顯微鏡觀察其外觀、形態(tài)、有無污染等，取狀態(tài)良好的細(xì)胞進(jìn)行凍存操作。如為貼壁生長細(xì)胞，用yi蛋白酶消化并用全培養(yǎng)基終止消化，進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)；如為懸浮生長細(xì)胞，進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)。
2、離心，棄上清。
3、加入適量的通用細(xì)胞凍存液，重懸細(xì)胞，使細(xì)胞濃度達(dá)到、ml，置于凍存管中，密封，不要擰的太緊，避免彎曲變形。
4、一般進(jìn)行凍存。亦可采用-20℃30min，-70℃過夜，最后置于液氮罐中長期存儲。
注意事項：
1、注意在超凈工作臺內(nèi)無菌操作，盡量避免污染。
2、初次使用融化后可在4℃保存1個月，單應(yīng)減少反復(fù)凍融的次數(shù)，以免失效。
3、雜交瘤細(xì)胞凍存時應(yīng)定期復(fù)蘇，檢查細(xì)胞的活性和分泌抗體的穩(wěn)定性。
4、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
