| 上海宇淳生物科技有限公司
主營產(chǎn)品： PCR八聯(lián)排管,sigma現(xiàn)貨,Cy7試劑 |
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| 參考價 | ￥ 100 |
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- 所在地 上海市
更新時間：2023-05-06 10:49:03瀏覽次數(shù)：683
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免疫熒光
免疫熒光：用抗原抗體特異性結(jié)合原理，在同一張切片上兩個抗原進行同時標(biāo)記，從而實現(xiàn)定位，定性，半定量的分析。
實驗步驟：
1. 石蠟切片脫蠟至水：依次將切片放入環(huán)保型脫蠟液10min-環(huán)保型脫蠟液10min-環(huán)保型脫蠟液10min-無水乙醇Ⅰ5min-無水乙醇Ⅱ5min-無水乙醇Ⅲ5min-蒸餾水洗。
2. 抗原修復(fù)：組織切片置于盛滿EDTA抗原修復(fù)緩沖液（PH8.0）的修復(fù)盒中于微波爐內(nèi)進行抗原修復(fù)。中火8min?；?min轉(zhuǎn)中低火7min，此過程中應(yīng)防止緩沖液過度蒸發(fā)，切勿干片。自然冷卻后將玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌3次，每次5min。(修復(fù)液和修復(fù)條件根據(jù)組織來確定）
3. 畫圈：切片稍甩干后用組化筆在組織周圍畫圈（防止抗體流走）
4. 血清封閉:在圈內(nèi)滴加BSA孵育30min。（一抗若是山羊來源，則加驢血清）
5. 加第一抗：輕輕甩掉封閉液，在切片上滴加PBS按一定比例配好的一抗，切片平放于濕盒內(nèi)4°C孵育過夜。（濕盒內(nèi)加少量水防止抗體蒸發(fā)）
6. 加二抗：玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加與一抗相應(yīng)種屬標(biāo)記的按一定比例配好的二抗覆蓋組織，室溫孵育50min。
7. DAPI復(fù)染細(xì)胞核：切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加DAPI染液，避光室溫孵育10min。
8. 自發(fā)熒光淬滅：切片稍甩干后，在圈內(nèi)加入自發(fā)熒光淬滅劑5min，流水沖洗10min。
9. 封片：玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后用抗熒光淬滅封片劑封片。
10. 鏡檢拍照：切片置于掃描儀下采集圖像或熒光顯微鏡下拍照。（DAPI紫外激發(fā)波長330-380nm，發(fā)射波長420nm，發(fā)藍(lán)光；FITC激發(fā)波長465-495nm，發(fā)射波長515-555 nm，發(fā)綠光；CY3激發(fā)波長510-560，發(fā)射波長590nm，發(fā)紅光. CY5激發(fā)波長 608-648nm, 發(fā)射波長672-712。 DAPI染出來的細(xì)胞核在紫外的激發(fā)下為藍(lán)色，陽性表達為相應(yīng)熒光素標(biāo)記的紅光，綠光 。
