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南京億迅生物科技有限公司
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| 參考價 | ￥ 1710 | ￥ 1280 |
| 訂貨量 | 1 件 | 5 件 |
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- 所在地 南京市
更新時間：2019-11-07 11:11:41瀏覽次數(shù)：524
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線粒體呼吸鏈復合體Ⅰ活性檢測試劑盒
測定意義
復合體Ⅰ（EC 1.6.5. 3）又稱NADH-CoQ 還原酶或NADH脫氫酶，廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞的線粒體中，是線粒體內(nèi)膜中大的蛋白復合物。該酶催化一對電子從NADH傳遞給CoQ，同時可使O2還原生成O2.-，是呼吸電子傳遞鏈上產(chǎn)生O2.-的主要部位。測定該酶活性，不僅可以反映呼吸電子傳遞鏈（ETC）狀態(tài)，而且可以反映活性氧（ROS）生成狀態(tài)。
需自備的儀器和用品
紫外分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、1mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制
試劑一：25mL×1瓶，-20℃保存；
試劑二：5mL×1瓶，-20℃保存；
試劑三：0.5 mL×1瓶，-20℃保存；
試劑四：25mL×1瓶，-20℃保存；
試劑五：1 mL×1支，-20℃保存；
試劑六：粉劑×1支，-20℃保存，用時加入2mL雙蒸水，用不完的試劑仍-20℃保存。
工作液的配制：臨用前將試劑五轉移到試劑四中混合溶解。
復合體Ⅰ的提?。?/span>
- 準確稱取0.1g組織或收集500萬細胞，加入1mL試劑一和10uL 試劑三，用冰浴勻漿器或研缽勻漿。
- 4 ℃ 600 g離心5min。
- 將上清液移至另一離心管中，4 ℃ 11000 g離心10min。
- 上清液即胞漿提取物，可用于測定從線粒體泄漏的復合體Ⅰ（此步可選做）。
- 在沉淀中加入200uL試劑二和2uL 試劑三，超聲波破碎（功率20％，超聲3秒，間隔10秒，重復30次），用于復合體Ⅰ酶活性測定。
測定步驟：
- 調零
用蒸餾水于340nm處調零。
- 樣本測定
（1）取40μL酶液和800μL工作液加入1mL玻璃比色皿，在37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）孵育5min。
（2）取出比色皿，加入60μL試劑六，混勻；立即記錄340nm處初始吸光值A1，37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）中準確反應2min，記錄340nm處2min后的吸光值A2，計算ΔA=A1-A2。
線粒體呼吸鏈復合體Ⅰ活性檢測試劑盒
