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南京億迅生物科技有限公司
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- 型號 MMP2/9活性
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- 廠商性質 生產商
- 所在地 南京市
更新時間：2019-11-06 16:52:03瀏覽次數(shù)：975
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MMP2是位于16號染色體的基因。
MMP-9基因位于染色體20q11.1~13.1，26~27kbp，具有13個外顯子和9個內含子，屬于基質金屬蛋白酶（matrix metalloprotein,MMP ）家族。主要功能是降解和重塑細胞外基質（extracellular matris）的動態(tài)平衡。
作用功能
該基因是基質金屬蛋白酶(MMP)基因家族的成員，是一種鋅依賴的酶，能夠切割細胞外基質的成分和參與信號轉導的分子。該基因編碼的蛋白是明膠酶A，IV型膠原酶，其催化位點中含有三個纖維連接蛋白II型重復序列，使變性IV型膠原和V型膠原與彈性蛋白結合。與大多數(shù)MMP家族成員不同，這種蛋白的激活可以發(fā)生在細胞膜上。這種酶可以被蛋白酶細胞外激活，也可以被S-谷胱甘肽化而被胞內激活，而不需要蛋白質溶出的前區(qū)。該蛋白被認為參與多種途徑，包括作用于神經系統(tǒng)，子宮內膜月經破裂，調節(jié)血管化，和轉移。該基因突變與Winchester綜合征和結節(jié)病-關節(jié)病-骨溶解綜合征(NAO)有關。選擇性剪接會導致編碼不同異構體的多個轉錄體變異。
檢測步驟：
1. 制備含MMP 底物蛋白的SDS-PAGE 凝膠：推薦分離膠濃度為8%。按照標準程序制備SDSPAGE
凝膠。將10 × substrate G 融化，并90 ?C 加熱5 分鐘。分別在濃縮膠和分離膠中額外加
入10 × substrate G 并使之稀釋10 倍，混勻后加入過硫酸銨和TEMED，等待凝膠聚合。
2. 待測樣品1:1 稀釋于2 × SDS-PAGE non-reducing buffer (用完后可自行配制：4% SDS, 100 mM
Tris-Cl pH6.8, 20% glycerol, 0.02% bromophnol blue)，混合后直接上樣。切勿加熱變性，并且僅
使用不加還原劑的上樣緩沖液?？赏ㄟ^預試驗確定加樣量，使用普通蛋白預染Marker 即可。陽
性對照(可選步驟)：可取人、小鼠、大鼠或兔100μl全血與100μl 2 × SDS-PAGE nonreducing
buffer 等體積混合，取5-15μl 上樣。
3. 低電流恒流電泳，每一塊小膠電流為20 mA/gel。溴酚藍跑出凝膠前沿時結束電泳。
4. 洗滌凝膠：取出凝膠，去除濃縮膠，放入容器內?？上扔眠m量蒸餾水沖洗凝膠，然后加入10 ml
1× Buffer A(用蒸餾水稀釋)，室溫漂洗凝膠2 × 30 分鐘。中間換液。
5. 孵育：倒掉Buffer A。加入10 ml 1× Buffer B(蒸餾水稀釋)，室溫或37?C 孵育1~5 小時。陽性
對照或者血中的MMP 通常37?C 孵育1 小時即可顯示。如MMP 活性低，應延長孵育時間為
10 小時或過一夜。
6. 顯色：倒掉Buffer B，加入SDS-PAGE 凝膠蛋白質考馬斯亮藍染色液（操作步驟見SDS-PAGE
凝膠蛋白質考馬斯亮藍染色液說明書）。凝膠的大部分區(qū)域被深染，在有MMP 條帶的位置
不被染色而形成透亮區(qū)域。透明區(qū)域的位置和范圍指示MMP-2、MMP-9 的大小位置(酶譜)及
活性。陽性對照將在66~72 (MMP-2)、92 (MMP-9)、130 (proMMP-9)、225 (proMMP-9) kDa
位置出現(xiàn)透明條帶。
7. 條帶掃描：將凝膠放在掃描儀上掃描。雖然MMP 條帶透明，但凝膠背景并非真正全黑。解決
辦法：可用非透射光掃描，或用軟件圖像處理程序調整背景顯示為灰度顯示，并盡量設置為黑色。
MMP 條帶則為白色，這種背景黑條帶白的格式是英文論文中zui常見的格式。
