預染發(fā)光Western Marker

描述：

傳統(tǒng)的 Western Blot 試驗需要使用預染蛋白 Marker 來跟蹤檢測陽性抗原信號和轉(zhuǎn)膜效率，但預染蛋白 Marker 無法在膠片上曝光，曝光信號需要根據(jù)膜上的預染蛋白 Marker來判斷。全新研發(fā)的Prestained & Western Blot Marker是專門為 Western Blot 試驗設計的分子量標準，由 9 種發(fā)光蛋白和 9 種預染蛋白組成；9 中發(fā)光蛋白分別為 23、30、36、44、50、62、90、120 和 160KDa，這些蛋白均可與抗體結合, 因此能與抗原在同一張膜上曝出信號，陽性信號可以直接通過 Western Marker 的位置來判斷；9 種預染蛋白分別為 15、25、35、40、55、70、100、130 和 180KDa，其中 70KDa為紅色，其他為藍色，轉(zhuǎn)膜完畢后在膜上肉眼可見。主要特征
可與抗原同時檢測信號，使 Western blot 結果判斷更加簡便發(fā)光 marker 沒有偶聯(lián)和標記其他分子，分子量更加準確綜合發(fā)光 marker 和預染 marker 的優(yōu)勢，既能監(jiān)測轉(zhuǎn)膜又能與抗原同時檢測
儲存：-20°C 保存，有效期 2 年。
使用方法
待 Prestained & Western Blot Marker 至室溫融化后，取 2~10 μl（通常 5μl）至上樣孔中，進行 SDS-PAGE 電泳；電泳完畢后轉(zhuǎn)至 PVDF 膜或 NC 膜，與一抗二抗孵育；孵育完畢后，將本品與抗原一起通過 ECL 曝光至膠片或熒光顯色。
注意事項：
1. 本產(chǎn)品可直接使用，不需要加熱。
2. 可根據(jù)抗體的效價或曝光時間的長短調(diào)整 Prestained & Western Blot Marker 的上樣量。
3. 使用新配制的凝膠，及時更換電泳緩沖液和轉(zhuǎn)膜液，以免影響實驗結果。

一、模板DNA：PCR反應需要模板DNA，如從細胞、組織、血液中提取DNA等；

二、引物：PCR反應的兩個引物，分別與模板DNA的兩端配對擴增所需的特定區(qū)域，引物也可以合成為TA克隆等過程中使用到的引物；

三、dNTPs：PCR反應中需要四種dNTPs，包括脫氧腺苷酸（dATP）、脫氧胸苷酸（dCTP）、脫氧鳥苷酸（dGTP）、脫氧胞嘧啶酸（dTTP），用于細胞分裂、DNA合成         等生物學過程，用于PCR擴增的模板DNA鏈的延伸和擴增；

四、Taq DNA聚合酶：PCR反應需要的聚合酶，一般使用Taq聚合酶，還有一些其他種類的聚合酶如PFU、Phusion等，用于擴增DNA鏈；

五、PCR buffer溶液：對PCR反應具有緩沖作用，調(diào)節(jié)反應pH，硫代硫酸氫鹽SDS、小分子有機化合物如甲醛，可增強PCR反應特異性，從而提高反應效率；

六、酶切體系：PCR擴增往往涉及到重組、構建和測序等等實驗步驟，常常需要進行酶切操作。

七、MARK:一種分子量標準，用來判別DNA片段大小的工具。

八、DNA純化試劑盒：用于純化PCR反應產(chǎn)物；

①Oligo dT
選擇Oligo dT時，要求RNA必須有Poly A，所以真核生物的mRNA都適用。適合長鏈甚至全長mRNA的RT，對RNA樣品的質(zhì)量要求較高，不要有明顯的DNA污染、RNA降解和RNA斷裂。假如想探索新的mRNA進行RT反應，建議推薦使用Oligo dT引物。使用Oligo dT引物要比隨機引物和特異性引物的穩(wěn)定性要好。
②隨機引物
適合各種RNA的RT，尤其適合模板豐度很低的情況（比如某個gene表達量很低）。選擇隨機引物時，鏈cDNA合成反應中就是以所有的RNA為模板，然后進行PCR反應時設計引物進行特異性擴增。同時要注意隨機引物的量和總RNA量之間的關系，一般建議每5µg總RNA的隨機引物的用量為50ng，如果每5µg總RNA的隨機引物的用量超過250ng，可能會導致小片段產(chǎn)物（＜500bp）的增加和長片段、全長產(chǎn)物的降低。
③特異性引物
基因特異性引物（GSP）是某個基因序列的一部分，與模板互補的引物。該引物需要結合目標RNA的已知序列進行設計。由于引物和RNA序列特異性結合，每個目標RNA都需要一套新的基因特異性引物。因此，當分析多種目標時，則需要適用更多的RNA樣本。而且不同引物退火溫度本來就不相同，所以一般不推薦使用。如需要使用特異性引物，建議對退火溫度進行優(yōu)化。