2×Taq PCR MasterMix( 不含染料 )

儲(chǔ)存條件：-20℃保存。

制品說(shuō)明： 本產(chǎn)品包含 Taq DNA 聚合酶、dNTPs、MgCl2、反應(yīng)緩沖液，濃度為 2×。具有快速簡(jiǎn)便、靈敏度高、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性好等 優(yōu)點(diǎn)，可限度的減少人為誤差。使用時(shí)只需加入 DNA 模板和引物既可。 本產(chǎn)品使用方便快捷，能避免 PCR 操作過(guò)程中的污染，使用時(shí)只需取適量 2×Taq PCR Master Mix 溶液，加入模板和引物， 并加入去離子水補(bǔ)足體積，使 Master Mix 溶液濃度為 1×即可進(jìn)行反應(yīng)。使用前請(qǐng)保證充分溶解并混勻，操作需在冰上進(jìn)行。專 用于聚丙烯酰胺凝膠檢測(cè)。

產(chǎn)品內(nèi)容：
0.05units/µl Taq DNA Polymerase (recombinant)、 4mM MgCl2、0.4mM dNTPs (dATP, dCTP, dGTP, dTTP)
質(zhì)量控制：
經(jīng)檢測(cè)無(wú)外源核酸酶活性；PCR 方法檢測(cè)無(wú)宿主殘余 DNA ；能有效地?cái)U(kuò)增人基因中的單拷貝基因；室溫存放一周，無(wú)明顯
活性改變。
適用范圍：
本產(chǎn)品不同批次之間誤差很小，特別適合大規(guī)模基因檢測(cè)，半定量 PCR 實(shí)驗(yàn)和微量 DNA 的檢測(cè)。
DNA 擴(kuò)增和一些有特殊結(jié)構(gòu)的復(fù)雜模板和 GC 含量高（>60%），有二級(jí)結(jié)構(gòu)等的擴(kuò)增：DNA 片段的 PCR 擴(kuò)增、DNA 標(biāo)記、
引物延伸、序列測(cè)定等。PCR 產(chǎn)物帶 A，純化后可直接用 TA 克隆。
PCR 反應(yīng)舉例：
（提示：以下舉例僅供參考。實(shí)際反應(yīng)條件因模板、引物等的結(jié)構(gòu)不同而各異，需根據(jù)實(shí)際情況，設(shè)定反應(yīng)條件。）
1．用 2×Taq PCR Master Mix 產(chǎn)品，以人基因組 DNA 為模板，擴(kuò)增 1kb 的片段，反應(yīng)體系為 25µl（如反應(yīng)體系不同，可按此比例增加或減少用量）。

一、模板DNA：PCR反應(yīng)需要模板DNA，如從細(xì)胞、組織、血液中提取DNA等；

二、引物：PCR反應(yīng)的兩個(gè)引物，分別與模板DNA的兩端配對(duì)擴(kuò)增所需的特定區(qū)域，引物也可以合成為T(mén)A克隆等過(guò)程中使用到的引物；

三、dNTPs：PCR反應(yīng)中需要四種dNTPs，包括脫氧腺苷酸（dATP）、脫氧胸苷酸（dCTP）、脫氧鳥(niǎo)苷酸（dGTP）、脫氧胞嘧啶酸（dTTP），用于細(xì)胞分裂、DNA合成         等生物學(xué)過(guò)程，用于PCR擴(kuò)增的模板DNA鏈的延伸和擴(kuò)增；

四、Taq DNA聚合酶：PCR反應(yīng)需要的聚合酶，一般使用Taq聚合酶，還有一些其他種類的聚合酶如PFU、Phusion等，用于擴(kuò)增DNA鏈；

五、PCR buffer溶液：對(duì)PCR反應(yīng)具有緩沖作用，調(diào)節(jié)反應(yīng)pH，硫代硫酸氫鹽SDS、小分子有機(jī)化合物如甲醛，可增強(qiáng)PCR反應(yīng)特異性，從而提高反應(yīng)效率；

六、酶切體系：PCR擴(kuò)增往往涉及到重組、構(gòu)建和測(cè)序等等實(shí)驗(yàn)步驟，常常需要進(jìn)行酶切操作。

七、MARK:一種分子量標(biāo)準(zhǔn)，用來(lái)判別DNA片段大小的工具。

八、DNA純化試劑盒：用于純化PCR反應(yīng)產(chǎn)物；

①Oligo dT
選擇Oligo dT時(shí)，要求RNA必須有Poly A，所以真核生物的mRNA都適用。適合長(zhǎng)鏈甚至全長(zhǎng)mRNA的RT，對(duì)RNA樣品的質(zhì)量要求較高，不要有明顯的DNA污染、RNA降解和RNA斷裂。假如想探索新的mRNA進(jìn)行RT反應(yīng)，建議推薦使用Oligo dT引物。使用Oligo dT引物要比隨機(jī)引物和特異性引物的穩(wěn)定性要好。
②隨機(jī)引物
適合各種RNA的RT，尤其適合模板豐度很低的情況（比如某個(gè)gene表達(dá)量很低）。選擇隨機(jī)引物時(shí)，鏈cDNA合成反應(yīng)中就是以所有的RNA為模板，然后進(jìn)行PCR反應(yīng)時(shí)設(shè)計(jì)引物進(jìn)行特異性擴(kuò)增。同時(shí)要注意隨機(jī)引物的量和總RNA量之間的關(guān)系，一般建議每5µg總RNA的隨機(jī)引物的用量為50ng，如果每5µg總RNA的隨機(jī)引物的用量超過(guò)250ng，可能會(huì)導(dǎo)致小片段產(chǎn)物（＜500bp）的增加和長(zhǎng)片段、全長(zhǎng)產(chǎn)物的降低。
③特異性引物
基因特異性引物（GSP）是某個(gè)基因序列的一部分，與模板互補(bǔ)的引物。該引物需要結(jié)合目標(biāo)RNA的已知序列進(jìn)行設(shè)計(jì)。由于引物和RNA序列特異性結(jié)合，每個(gè)目標(biāo)RNA都需要一套新的基因特異性引物。因此，當(dāng)分析多種目標(biāo)時(shí)，則需要適用更多的RNA樣本。而且不同引物退火溫度本來(lái)就不相同，所以一般不推薦使用。如需要使用特異性引物，建議對(duì)退火溫度進(jìn)行優(yōu)化。