RNAsafe 高效 RNase 滅活劑

保存條件：－20℃保存半年以上。
產(chǎn)品介紹：
RNAsafe 含有數(shù)種特殊化合物，可使 RNase 失活，高效去除各種溶液或者反應(yīng)緩沖液中可能存在的 RNase，從而防止 RNA 的降解。RNAsafe 可用于制備 RNA 懸浮液，并可加入到各種 RNA 的反應(yīng)液中（如體外轉(zhuǎn)錄、逆轉(zhuǎn)錄、RT-PCR、探針制備、分子雜交、Nuclease Protection Assay 等）。滅活可能存在的微量 Rnase 污染，保持 RNA 穩(wěn)定性，獲得更佳實驗結(jié)果。
產(chǎn)品特點：
1. 適合于各種緩沖液，包括不能由DEPC處理的Tris及MOPS緩沖液系統(tǒng)等。
2. 安全，方便地去除溶液中微量的RNase。
3. 處理過的溶液隨時可以再處理（60℃ 10-20 min），以去除任何可能發(fā)生的后續(xù)RNase污染。
4. 不影響逆轉(zhuǎn)錄酶、RNA聚合酶和耐熱DNA聚合酶的活性，可用于逆轉(zhuǎn)錄和體外轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。
5. 處理后不需高壓滅菌。
使用方法：
1. 本品為 20×濃縮液，在待處理的一般溶液或反應(yīng)緩沖液中稀釋 20×RNAsafe 到終濃度為 1×的工作濃度。如：95μl 待處理溶液中可加 5μl RNAsafe。
2. 60℃處理 20 min 以使 RNase 失活。經(jīng) RNAsafe 處理后的溶液冷卻至室溫即可使用。處理過的溶液可再次處理（60℃ 10-20 min），以去除存儲過程中可能發(fā)生的 RNase 污染。溶液冷卻到室溫后再加入逆轉(zhuǎn)錄酶等對高溫敏感的酶制劑。

一、模板DNA：PCR反應(yīng)需要模板DNA，如從細胞、組織、血液中提取DNA等；

二、引物：PCR反應(yīng)的兩個引物，分別與模板DNA的兩端配對擴增所需的特定區(qū)域，引物也可以合成為TA克隆等過程中使用到的引物；

三、dNTPs：PCR反應(yīng)中需要四種dNTPs，包括脫氧腺苷酸（dATP）、脫氧胸苷酸（dCTP）、脫氧鳥苷酸（dGTP）、脫氧胞嘧啶酸（dTTP），用于細胞分裂、DNA合成         等生物學過程，用于PCR擴增的模板DNA鏈的延伸和擴增；

四、Taq DNA聚合酶：PCR反應(yīng)需要的聚合酶，一般使用Taq聚合酶，還有一些其他種類的聚合酶如PFU、Phusion等，用于擴增DNA鏈；

五、PCR buffer溶液：對PCR反應(yīng)具有緩沖作用，調(diào)節(jié)反應(yīng)pH，硫代硫酸氫鹽SDS、小分子有機化合物如甲醛，可增強PCR反應(yīng)特異性，從而提高反應(yīng)效率；

六、酶切體系：PCR擴增往往涉及到重組、構(gòu)建和測序等等實驗步驟，常常需要進行酶切操作。

七、MARK:一種分子量標準，用來判別DNA片段大小的工具。

八、DNA純化試劑盒：用于純化PCR反應(yīng)產(chǎn)物；

①Oligo dT
選擇Oligo dT時，要求RNA必須有Poly A，所以真核生物的mRNA都適用。適合長鏈甚至全長mRNA的RT，對RNA樣品的質(zhì)量要求較高，不要有明顯的DNA污染、RNA降解和RNA斷裂。假如想探索新的mRNA進行RT反應(yīng)，建議推薦使用Oligo dT引物。使用Oligo dT引物要比隨機引物和特異性引物的穩(wěn)定性要好。
②隨機引物
適合各種RNA的RT，尤其適合模板豐度很低的情況（比如某個gene表達量很低）。選擇隨機引物時，鏈cDNA合成反應(yīng)中就是以所有的RNA為模板，然后進行PCR反應(yīng)時設(shè)計引物進行特異性擴增。同時要注意隨機引物的量和總RNA量之間的關(guān)系，一般建議每5µg總RNA的隨機引物的用量為50ng，如果每5µg總RNA的隨機引物的用量超過250ng，可能會導(dǎo)致小片段產(chǎn)物（＜500bp）的增加和長片段、全長產(chǎn)物的降低。
③特異性引物
基因特異性引物（GSP）是某個基因序列的一部分，與模板互補的引物。該引物需要結(jié)合目標RNA的已知序列進行設(shè)計。由于引物和RNA序列特異性結(jié)合，每個目標RNA都需要一套新的基因特異性引物。因此，當分析多種目標時，則需要適用更多的RNA樣本。而且不同引物退火溫度本來就不相同，所以一般不推薦使用。如需要使用特異性引物，建議對退火溫度進行優(yōu)化。