傅經(jīng)理
樹脂包埋(透射電鏡)
價格:220元
樹脂包埋實驗步驟:
1、取材:電鏡取材非常嚴格,取材過程中速度要快,5分鐘內(nèi)要將組織取出放入固定液中;取材組織塊要小,一般要求將組織切成1立方毫米大小;取材部位要準確、取材溫度要低zuihao是在4℃條件下進行;取材工具要干凈,鋒利。如果是貼壁細胞不可用酶消化下來,先吸去培養(yǎng)液然后加入電鏡固定液用橡膠塊刮下細胞,離心,細胞體積保證綠豆大小即可,然后吸去上清更換固定液繼續(xù)固定。
2、固定:取材后要及時固定,組織、細胞、蛋白等固定選用2.5%中性戊二醛固定液,植物等標本則需要選用多聚甲醛和戊二醛的混合固定液。室溫固定兩小時左右后,放入4℃保存運輸(如果是植物或者肺組織,則需要進行真空抽氣固定,一般需要抽氣固定24小時左右,直至標本*沉入容器底部)。
3、鋨酸后固定:將標本從固定液中取出,用0.1mol/L的PB清洗并過夜,第二天轉(zhuǎn)入1%鋨酸后固定,固定時間普通標本2h左右,植物標本8至12h左右。
4、脫水:鋨酸固定后的標本用用0.1mol/L的PB清洗后使用梯度乙醇脫水,濃度依次是50%、70%、80%、90%、95%、,植物標本則會在50%乙醇前面再增加一個30%乙醇梯度,脫水時間普通標本為10~15min,植物標本脫水時間為1~1.5h4、浸透:用丙酮作為乙醇和樹脂間的過度溶劑,從純丙酮開始,中間經(jīng)過丙酮和樹脂的混合劑,混合比例丙酮從高到低到純樹脂,整個浸透過程需要1~2天完成。
5、包埋:先將組織對應(yīng)的標簽放包埋板中,然后加入樹脂,再將浸透好的樣本放入包埋板中,調(diào)整好包埋面,然后放入恒溫箱內(nèi)熟化,熟化過程需要2~3天。熟化完成后,樣本樹脂包埋完成。
樹脂包埋(透射電鏡)
注意事項:
標本編號盡量簡潔
1、 動物組織樣本:1-3min內(nèi)取樣,取樣組織米粒大小,盡量薄,部位jingzhun,如來不及修整組織大小可先于電鏡固定液內(nèi)固定半小時左右待組織變硬以后再修整組織進行后固定。
2、 植物組織樣本 :取材要求同動物組織樣本,盡量取較嫩的部位。組織投入固定液后需要進行真空抽氣讓組織沉底,如無條件抽氣可用濾紙將組織塞進固定液內(nèi)
3、 細胞樣本:貼壁細胞:培養(yǎng)好的細胞棄培養(yǎng)基不經(jīng)漂洗迅速加電鏡固定液用細胞刮輕輕刮下細胞收集到離心管內(nèi)(對細胞形態(tài)無要求的可以用酶消化細胞),離心收集細胞要肉眼可見細胞沉淀芝麻至綠豆大?。?000轉(zhuǎn),5min),棄固定液后加新的電鏡固定液室溫固定2h,再轉(zhuǎn)移至4°保存
4、 懸浮細胞:離心收集細胞要肉眼可見細胞沉淀芝麻至綠豆大小,棄培養(yǎng)基后加電鏡固定液室溫固定2h,再轉(zhuǎn)移至4°保存
細菌樣本:長于固體培養(yǎng)基的細菌:連帶著培養(yǎng)基一起挑下細菌放于電鏡固定液內(nèi)室溫固定2h,再轉(zhuǎn)移至4°保存
5、 懸浮細菌孢子等:離心收集細菌要肉眼可見細菌沉淀芝麻至綠豆大小,棄
培養(yǎng)基后加電鏡固定液室溫固定2h,再轉(zhuǎn)移至4°保存
6、 有磁性的樣本不接