目錄:上海帛科生物技術(shù)有限公司>>生化檢測試劑盒>>脂肪酸代謝系列>> 脂蛋白酯酶(LPL)測試盒可見分光光度法
貨號 | BK-01S6662 |
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特別提醒:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測。
產(chǎn)品名稱:脂蛋白酯酶(LPL)測試盒可見分光光度法
產(chǎn)品規(guī)格:50管/24樣
檢測方法:可見分光光度法
產(chǎn)品貨號:BK-01S6662
產(chǎn)品分類:脂肪酸代謝系列
商品介紹:
測定意義: 脂蛋白酯酶是脂肪細(xì)胞、心肌細(xì)胞、骨骼肌細(xì)胞、乳腺細(xì)胞及巨噬細(xì)胞等實(shí)質(zhì)細(xì)胞合成的一種酶,可催化甘油三脂水解為脂肪酸和單酸甘油酯,以供組織氧化供能和貯存,并在不同的組織表現(xiàn)出不同的生理意義。 測定原理 脂蛋白酯酶水解4-硝基苯棕櫚酸酯產(chǎn)生4-硝基,在400nm有特征吸收峰。 自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器 天平、冷凍離心機(jī)、研缽、水浴鍋、可見分光光度計(jì)、1 mL玻璃比色皿。 |
所需的儀器和用品:
可見分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶(SOD)的測定:
建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測定,了解本批樣品情況,熟悉實(shí)驗(yàn)流程,避免實(shí)驗(yàn)
樣本和試劑浪費(fèi)!
1、樣本制備
① 組織樣本: 取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進(jìn)行 勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測液。 【注】:若增加樣本量,可按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例進(jìn)行提取
| ② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本: 先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;取約 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次); 12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。 【注】:若增加樣本量,可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量(10 4):提取液(mL)為 500~1000:1 的比例進(jìn)行提取。 ③ 液體樣本:直接檢測;若渾濁,離心后取上清檢測。 |
實(shí)驗(yàn)方法學(xué):
一、肝素的配制:
市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些??梢匀?.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。
肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動,每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集:
全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí),不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時(shí),直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。
選擇抗凝的注意點(diǎn):
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后
用于測定。
Voges-Proskauer(V-P)試劑盒 Voges-Proskauer(V-P) reagent box 5ml*4
250mg 四唑紫 INT(Iodonitrotetrazolium Chloride) 4℃避光保存
50T 瘧原蟲PCR檢測試劑盒 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
5mL 間充質(zhì)干細(xì)胞生長因子 Growth Factor For Cell Culture -20℃保存
50T 凋亡抑制蛋白Survivin基因PCR檢測試劑盒 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
1.5mL DNA 非變性PAGE上樣液 DNA Native-PAGE Loading Buffer -20℃保存
2 ug pGCX-6p-1 pGCX-6p-1 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
阿奇檢定培養(yǎng)基 Azithromycin Test Medium 250g
1瓶 Daudi細(xì)胞株 Daudi 低溫運(yùn)輸和保存
RODAC培養(yǎng)皿(TSA)(55mm) RODAC 10個(gè)/包
1000U T4 DNA連接(T4 DNA Ligase) T5 DNA Ligase -21℃保存
脂蛋白酯酶(LPL)測試盒可見分光光度法Goat Anti-Guinea pig IgG/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350標(biāo)記的羊抗豚鼠IgG 規(guī)格: 0.1ml
Phospho-RASGRF1(Ser929) 磷酸化Ras特異性核苷酸釋放因子1 規(guī)格: 0.1ml
FANCG DNA損傷修復(fù)基因XRCC9抗體 規(guī)格: 0.1ml
Phospho-MSK1 (Ser360) 磷酸化有絲分裂原和應(yīng)激活化型蛋白激1抗體 規(guī)格: 0.1ml
AP-TNAP/ALPL 堿性磷酸抗體 規(guī)格: 0.1ml
CD161 CD161抗體 規(guī)格: 0.1ml
Rabbit Anti-human sIgA/Alexa Fluor 350 Alexa Fluor 350標(biāo)記的兔抗人分泌型IgA 規(guī)格: 0.1ml
Ferritin 鐵蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
A1BG α1B糖蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
phospho-ERK1(Thr202/Tyr204) 磷酸化絲裂原活化蛋白激1抗體 規(guī)格: 0.1ml
phospho-SYN1(Ser549) 磷酸化神經(jīng)突觸素1抗體 0.1ml
BNIP3L 促凋亡BNIP3L蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
注意事項(xiàng):
1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時(shí)在冰上放置。
2、對照管只需要做一管。
3、若對照管吸光值大于2,建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用(10μl試劑二原液+60μl蒸餾水)。
4、SOD為什么有的樣本測定管大于對照管,對照管數(shù)值在什么范圍?
對照管的范圍是0.8-2。對照管吸光值過低可能是(1)試劑二或試劑四沒有現(xiàn)配現(xiàn)用;(2)沒有按順序加試劑;(3)反應(yīng)時(shí)間不夠,可以延長反應(yīng)時(shí)間(反應(yīng)時(shí)間30min可以延長到40min)。對照管吸光值過高可能是試劑二未按操作說明書稀釋相應(yīng)倍數(shù)。
若出現(xiàn)測定管大于對照管,可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大,為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測,通??梢允箿y定正常。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
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