5-FAM-YVAD-FMK Caspase的試劑是美國AAT Bioquest生產(chǎn)的，F(xiàn)AM-YVAD-FMK，即5-羧基熒光素-Tyr-Val-Ala-Asp-氟甲基酮，在刺激的細胞中不可逆地結(jié)合到活性胱天蛋白酶1。 FAM-YVAD-FMK信號的熒光強度與活性半胱天冬酶1的量成正比，可以通過熒光顯微鏡，流式細胞儀或熒光酶標儀輕松檢測。百螢生物是AAT Bioquest的中國代理商，為您提供優(yōu)質(zhì)的5-FAM-YVAD-FMK Caspase的試劑。

樣品操作及分析

以下說明書僅提供指導，實際實驗請根據(jù)您的特定需求進行修改。

使用AMC，AFC，pNA，R110和ProRed底物的常規(guī)胱天蛋白酶測定方案

1.在DMSO中準備10 mM的儲備溶液。

2.準備2X半胱天冬酶底物（50 µM）分析溶液：50 µL底物原液，100 µL DTT（1M），400 µL EDTA（100 mM），10 mL Tris Buffer（20 mM），pH = 7.4。

3.將等體積的半胱天冬酶標準品或樣品與2X半胱天冬酶底物測定溶液混合，并在室溫下孵育至少1小時。

4.使用熒光酶標儀檢測熒光或使用酶標儀檢測吸光度。

使用細胞滲透性FMK Caspase探針進行細胞Caspase測定

1.在DMSO中準備2-5 mM的儲備溶液。

2.根據(jù)需要處理細胞。

3.通過用20 mM Hepes緩沖液（HHBS）在Hanks中稀釋DMSO儲備溶液（來自步驟2.1），制備2X滲透性半胱天冬酶底物（20 µM）分析溶液。

4.將等體積的處理過的細胞與2X半胱天冬酶底物測定溶液混合（來自步驟2.3），并在37°C，5％CO2的培養(yǎng)箱中孵育細胞至少1小時。

5.用HHBS清洗細胞至少一次。

6.通過流式細胞儀，熒光顯微鏡或熒光酶標儀檢測熒光強度。

使用細胞滲透性FMK Caspase探針進行細胞半胱天冬酶測定（僅適用于＃13470-13476）

1.通過向小瓶中加入50 µL DMSO制備250X儲備液。

2.根據(jù)需要處理細胞。

3.以1：250的比例將250X DMSO儲備溶液添加到細胞溶液中（例如2 µL至500 µL細胞），并將細胞在37°C，5％CO2的培養(yǎng)箱中孵育1小時。

4.用HHBS清洗細胞至少一次。

5.通過流式細胞儀，熒光顯微鏡或熒光酶標儀檢測熒光強度。