樣品實(shí)驗(yàn)方案

簡(jiǎn)要概述

1.準(zhǔn)備細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染

2.準(zhǔn)備Transfectamine 5000-DNA混合物

3.將Transfectamine 5000-DNA混合物添加到細(xì)胞培養(yǎng)物中

4.過夜培養(yǎng)

5.用適當(dāng)?shù)姆椒ǚ治鲛D(zhuǎn)染效率

溶液制備

1.工作溶液配制

1.1將2.5ug DNA與200uL無血清培養(yǎng)基混合。

1.2在步驟1中添加7.5 uL Transfectamine 5000。

1.3充分混合并在室溫下孵育20分鐘。 注意：Transfectamine 5000和DNA的比例需要針對(duì)不同的細(xì)胞系進(jìn)行優(yōu)化，通常：轉(zhuǎn)染試劑（uL）與DNA（ug）的比例= 3-5 uL至1ug

6孔板與10cm板樣品方案

樣品示例及操作

1.細(xì)胞培養(yǎng)準(zhǔn)備

1.1轉(zhuǎn)染時(shí)將細(xì)胞培養(yǎng)至約90％融合。

1.2轉(zhuǎn)染前用新鮮的生長(zhǎng)培養(yǎng)基替換。 例如，對(duì)于6孔板，每孔用2 mL培養(yǎng)基替換，對(duì)于10 cm板，用6 mL培養(yǎng)基替換。

2.轉(zhuǎn)染方案

將Transfectamine 5000 -DNA混合物添加至培養(yǎng)板并培養(yǎng)過夜。 注意：重組蛋白早可在轉(zhuǎn)染后16小時(shí)開始檢測(cè)。轉(zhuǎn)染后72?96小時(shí)可觀察到大表達(dá)水平。