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一、血液的采集
常用的采血方法有割(剪)尾采血、眼眶靜脈叢采血、斷頭采血、心臟采血、頸靜脈(動脈)采血、股動脈(靜脈)采血、耳靜脈采血、前肢頭靜脈才學、后肢小靜脈采血等。
二、尿液的采集
實驗動物的尿液常用代謝籠采集,也可通過其他裝置來采集。
(一)用代謝籠采集尿液
代謝籠用于收集實驗動物自然排出的尿液,是一種特別設計的為采集實驗動物各種排泄物的密封式飼養(yǎng)籠,有的代謝籠除可收集尿液外,又可收集糞便和動物呼出的CO2。一般簡單的代謝籠主要用來收集尿液。防在代謝籠內(nèi)飼養(yǎng)的實驗動物,可通過其特殊裝置收集尿液。
(二)導尿法收集尿液
施行導尿術,較適宜于犬、猴等大動物。一般不需要麻醉,導尿時將實驗動物仰臥固定,用甘油潤滑*。對雄性動物,操作員用一只手握住陰J,另一只手將陰J包皮向下,暴露龜T,使尿道口張開,將*緩慢插入,*推進到尿道膜部時有抵抗感,此時注意動作輕柔,繼續(xù)向膀胱推進*,即有尿液流出。雌性動物尿道外口在陰D前庭,導尿時于陰D前庭腹側(cè)將*插入陰D外口,其后操作同雄性動物導尿術。
用導尿法導尿可采集到?jīng)]有污染的尿液。如果嚴格執(zhí)行無菌操作,可收集到無菌尿液。
(三)輸尿管插管采集尿液
一般用于要求計量單位時間內(nèi)實驗動物排尿量的實驗。剖腹后,將膀胱牽拉至腹腔外,暴露膀胱底兩側(cè)的輸尿管。在兩側(cè)輸尿管近膀胱處用線分別結(jié)扎,于輸尿管結(jié)扎處上方剪一小口,向腎臟方向分別插入充滿生理鹽水的插管,用線結(jié)扎固定插管,即可見尿液從插管滴出,可以收集。采尿過程中要用38℃熱生理鹽水紗布遮蓋切口及膀胱。
(四)壓迫膀胱采集尿液
實驗人員用手在實驗動物下腹部加壓,手法既輕柔又有力。當增加的壓力使實驗動物膀胱括約肌松弛時,尿液會自動流出,即行收集。
(五)穿刺膀胱采集尿液
實驗動物麻醉固定后,剪去下腹部恥骨聯(lián)合之上,腹正中線兩側(cè)的被毛,消毒后用注射針頭接注射器穿刺。取鈍角進針,針頭穿過皮膚后稍微改變角度,以避免穿刺后漏尿,然后刺向膀胱方向,邊緩慢進針邊回抽,直到抽到尿液為止。
(六)剖腹采集尿液
按上述穿刺膀胱采集尿液法做術前準備,其皮膚準備范圍應更大。剖腹暴露膀胱,直視下穿刺膀胱抽取尿液。也可于穿刺前用無齒鑷夾住部分膀胱壁,從鑷子下方的膀胱壁進針抽尿。
(七)提鼠采集尿液(即反射排尿法)
鼠類被人抓住尾巴提起即出現(xiàn)排尿反射,以小鼠的這種反射zui明顯。可以利用這一反射收集尿液。當鼠類被提起尾巴排尿后,尿滴掛在尿道外口附近的被毛上,不會馬上流走,操作人員應迅速用吸管或玻璃管接住尿滴。
(八)膀胱插管法
腹部手術同輸尿管插管。將膀胱翻出腹外后,用絲線結(jié)扎膀胱頸部,阻斷它同尿道的通路。然后在膀胱頂部避開*一小口,插入膀胱漏斗,用絲線做以荷包縫合固定。漏斗正對著輸尿管的入口處。注意不要緊貼膀胱后壁而堵塞輸尿管。下端接橡皮管插入帶刻度的容器內(nèi)以收集尿液。
三、胸水和腹水的采集
(一)胸水的采集
主要采用胸腔穿刺法收集實驗動物的胸水,也可處死實驗動物剖開胸腔采集胸水。
1、穿刺點定位
于實驗動物腋后線第11~12肋間隙穿刺,穿刺針緊貼肋骨上緣,否則容易損傷肋間神經(jīng)。也可在胸壁近胸骨左側(cè)緣第4~5肋間隙穿刺。
2、穿刺方法
收集胸水常采用穿刺法。如果實驗不要求動物繼續(xù)存活,也可用處死動物剖胸取胸水。穿刺部位在動物脊側(cè)腋后線胸壁第11~12肋間隙穿刺較安全。此部位是肺zui下界之外側(cè),既可避免損傷肺組織造成氣胸,又易采集在隔肋竇的胸水。此外,也可在腹側(cè)胸壁近胸骨左側(cè)緣第4~5肋間隙穿刺。如果有條件在穿刺針頭與注射器之間連一個三通管,但應注意正確運用三通管。
實驗動物取立位或半臥位固定,局部皮膚去毛、消毒、麻醉,穿刺針頭與注射器之間接三通連接裝置,實驗人員以左手拇指、食指繃緊局部皮膚,右手用帶夾的橡皮管套上12~14號針頭,沿肋骨前緣小心地垂直刺入(緊靠肋骨下緣處垂直進針),穿刺肋間肌時產(chǎn)生一定阻力,當阻力消失有落空感時,說明已刺入胸膜腔,用左手固定穿刺針,打開三通連接裝置,緩慢抽取胸水。穿刺結(jié)束迅速拔出針頭,輕揉穿刺部位,促進針孔閉合并注意消毒。
操作中嚴防空氣進入胸腔,始終保持胸腔負壓。穿刺應用手控制針頭的深度,以防穿刺過深刺傷肺臟。
(二)腹水的采集
1、抽取狗等大動物腹水,讓狗按自然站立位固定,穿刺部位在恥骨前緣與臍之間,腹中線兩側(cè)。剪毛消毒,局部浸潤麻醉。操作者左手姆、食指緊繃穿刺部位的皮膚,右手控制穿刺深度做垂直穿刺。注意不可刺的太深,以免刺傷內(nèi)臟。穿刺針進入腹腔后,腹水多時可見因腹壓高而自動流出。腹水太少可輕輕回抽,并同時稍稍轉(zhuǎn)動一下針頭,一旦有腹水流出,立即固定好針頭及注射器的位置連續(xù)抽取。
2、抽取大鼠、小鼠的腹水方法簡單,用左手拇指及食指捏住動物頸部皮膚,無名指、小手指及手掌夾住其尾巴固定好動物,使其腹部略朝上,在腹股溝和腹中線之間,消毒皮膚,用8號針頭刺入腹腔,如腹壓高腹水自然流出,如腹水太少,可借助注射器抽取。
抽腹水時注意不可速度太快,腹水多時不要一次大量抽出,以免因腹壓突然下降導致動物出現(xiàn)循環(huán)功能障礙等問題。
四、 分泌液的采集
(一)陰D分泌物的采集
適于觀察陰D角質(zhì)化上皮細胞。
1、 滴管沖洗法
用消毒滴管吸取少量生理鹽水仔細、反復沖洗被檢雌性動物陰D,將沖洗液吸出滴在載波片上晾干后染色鏡檢。也可直接將沖洗液置于低倍顯微鏡下觀察,根據(jù)細胞類型變化鑒別實驗動物動情周期中的不同時期。
2、棉拭子法
用消毒棉拭子旋轉(zhuǎn)插入動物陰D內(nèi),然后在陰D內(nèi)輕輕轉(zhuǎn)動幾下后取出,即可進行涂片鏡檢。有的動物如大、小鼠等,陰D液較少,取其陰D液時,可用先浸濕后又擠盡無菌生理鹽水的棉拭子取陰D液,這種棉拭子比干棉拭子容易插入陰D。對體型較大的實驗動物,也可先按摩或刺激其陰部,而后再采集其陰D液。
3、刮取法
用光滑的玻璃小勺或牛角制的小刮片慢慢插入陰D內(nèi),在陰D壁輕輕刮取一點陰D內(nèi)含物,進行涂片鏡檢。
(二)精液(semen)的采集
1、人工陰D套采精液法
本法適用于犬、豬、羊等大動物,采用特制的人工陰D套套在實驗動物陰J上采集精液。采精時,一手捏住陰D套,套住雄性動物的陰J,以*套住雄性動物的陰J為佳,插入陰D套后,若實驗動物發(fā)出低叫聲,表明已經(jīng)射精。此時可取下陰D套,拆下采精瓶,取出精液,迅速做有關檢查。
2、陰D栓采精法
本法是將陰D栓涂片染色,鏡檢凝固的精液。陰D栓是雄性大、小鼠的精液和雌性陰D分泌物混合,在雌鼠陰D內(nèi)凝結(jié)而成白色稍透明、圓錐形的栓狀物,一般交配后2~4小時即可在雌鼠陰D口形成,并可在陰D停留12~24小時。
3、其他采精液法
將發(fā)情的雌性動物放在雄性動物一起,當雄性動物被刺激發(fā)情后,立即將雄性動物分開,再用人工法刺激其射精。也可按摩雄性動物的生殖器或用電流等物理方法刺激雄性動物的陰J或其他性敏感區(qū),使雄性動物被刺激發(fā)情,直至射精,用采精瓶采集射出的精液。
(三)乳汁的采集
用按摩擠奶收集乳汁的方法適合犬、豬、羊等大動物乳汁的采集。選用哺乳期的實驗動物,在早上采集乳汁量zui多,用手指輕輕按摩實驗動物乳頭,使乳汁自然流出,如乳汁不能自然流出,可張開手掌從乳房基底部朝乳頭方向按摩、擠壓整個乳房,即可擠出乳汁。
五、消化液的采集
(一) 唾液
1、直接抽取法
在急性實驗中,可用吸管直接插入動物口腔或唾液腺導管抽吸唾液,此法非常簡單,但從口腔抽吸唾液會有雜質(zhì)混入。
2、制造腮腺瘺法
在慢性實驗中,收集狗的唾液,要用*方法將腮腺導管開口移向體外,即以腮腺導管為中心,切成一直徑約2~3cm的圓形粘膜片,將此粘膜片,與周圍組織分開,穿過皮膚切口引到頰外,將帶有導管開口的粘膜片與周圍的皮膚縫合,腮腺分泌的唾液就流出頰外。這種方法可以收集到較純凈的唾液。
(二)胃液
1、直接收集胃液法
急性實驗時,先將動物麻醉,將插*經(jīng)口插入胃內(nèi),在灌*的出口連一注射器,用此注射器可收集到胃液,此法適用于狗等大型動物。如是大鼠,需手術剖腹,從幽門端向胃內(nèi)插入一塑料管,再由口腔經(jīng)食道將一塑料管插入前胃,用pH7.5、35℃左右的生理鹽水,以12ml/h的流速灌胃,收集流出液,進行分析。
2、制備胃瘺法
在慢性實驗中,收集胃液多用胃瘺法,如全胃瘺法、巴氏小胃瘺法、海氏小胃瘺法等。制備小胃是將動物的胃分離出一小部分,縫合起來形成小胃,主胃與小胃互不相通,主胃進行正常消化,從小胃可收集到純凈的胃液。應用該法,可以待動物恢復健康后,在動物清醒狀態(tài)下反復采集胃液。
(三)胰液和膽汁
在動物實驗中,主要是通過對胰總管和膽總管的插管而獲得胰液或膽汁。狗的胰總管開口于十二指腸降部,在緊靠腸壁處切開胰管,結(jié)扎固定并與導管相連,即可見無色的胰液流入導管。大鼠的胰管與膽管匯集于一個總管,在其入腸處插管固定,并在近肝門處結(jié)扎和另行插管,可分別收集到胰液和膽汁。有時也可通過制備胰瘺和膽囊瘺來獲得胰液和膽汁。
六、腦脊液的采集
(一)狗、兔腦脊液的采集通常采取脊髓穿刺法
穿刺部位在兩髂連線中點稍下方第七腰椎間隙。動物輕度麻醉后,側(cè)臥位固定,使頭部及尾部向腰部盡量彎曲,剪去第七腰椎周圍的被毛。消毒后操作者在動物背部用左手姆、食指固定穿刺部位的皮膚,右手持腰穿刺針垂直刺入,當有落空感及動物的后肢跳動時,表明針已達椎管內(nèi)(蛛網(wǎng)膜下腔),抽去針芯,即見腦脊液流出。如果無腦脊液流出,可能是沒有刺破蛛網(wǎng)膜。輕輕調(diào)節(jié)進針方向及角度,如果腦脊液流的太快,插入針芯稍加阻塞,以免導致顱內(nèi)壓突然下降而形成腦疝。
(二)大鼠腦脊液的采集可采用枕大孔直接穿刺法
在大鼠麻醉后,頭部固定于定向儀上。頭頸部剪毛、消毒,用*沿縱軸切一縱行切口(約2cm)用剪刀鈍性分離頸部背側(cè)肌肉。為避免出血,zui深層附著在骨上的肌肉用*背刮開,暴露出枕骨大孔。由枕骨大孔進針直接抽取腦脊液。抽取完畢逢好外層肌肉、皮膚。刀口處可撒些磺胺藥粉,防止感染。采完腦脊液后,應注入等量的消毒生理鹽水,以保持原來腦脊髓腔的壓力。
七、骨髓的采集
1、大鼠、小鼠骨髓的采集
用頸椎脫臼法處死動物,剝離出胸骨或股骨,用注射器吸取少量的Hank*,沖洗出胸骨或股骨中全部骨髓液。如果是取少量的骨髓作檢查,可將胸骨或股骨剪斷,將其斷面的骨髓擠在有稀釋液的玻片上,混勻后涂片涼干即可染色檢查。
2、大動物骨髓的采集
狗等大動物骨髓的采集可采取活體穿刺方法。先將動物麻醉、固定、局部除毛、消毒皮膚,然后估計好皮膚到骨髓的距離,把骨髓穿刺針的長度固定好。操作人員用左手把穿刺點周圍的皮膚繃緊,右手將穿刺針在穿刺點垂直刺入,穿入固定后,輕輕左右旋轉(zhuǎn)將穿刺針鉆入,當穿刺針進入骨髓腔時常有落空感。狗骨髓的采集,一般采用髂骨穿刺。狗等大動物常用的骨髓穿刺點:胸骨:穿刺部位是胸骨體與胸骨柄連接處。肋骨:穿刺部位是第5~7肋骨各點的中點。脛骨:穿刺部位是股骨內(nèi)側(cè)、靠下端的凹面處。如果穿刺采用的是肋骨,穿刺結(jié)束后要用膠布封貼穿刺孔,防止發(fā)生氣胸。
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