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原代細(xì)胞培養(yǎng)條件：

?溫度?：通常在37℃下進(jìn)行，以模擬體內(nèi)溫度。

?pH值?：培養(yǎng)液的pH值應(yīng)保持在7.2~7.4之間，以維持細(xì)胞的正常生理狀態(tài)。

?氣體環(huán)境?：在含有5% CO2的培養(yǎng)箱中進(jìn)行，以促進(jìn)細(xì)胞生長。

?培養(yǎng)基?：使用含有適當(dāng)營養(yǎng)成分的培養(yǎng)基，如Eagle's MEM、DMEM等。

?無菌操作?：整個培養(yǎng)過程需要在無菌條件下進(jìn)行，以防止污染。

本產(chǎn)品僅供科學(xué)實驗研究使用! 不能用于臨床或動物診斷！

細(xì)胞簡介：

人食管癌成纖維分離自食管癌組織；食管癌是常見的消化道腫瘤，每年約有30萬人死于食管癌。其發(fā)病率和死亡率各國差異很大。我國是世界上食管癌高發(fā)地區(qū)之一，每年平均病死約15萬人。男多于女，發(fā)病年齡多在40歲以上。食管癌典型的癥狀為進(jìn)行性咽下困難，先是難咽干的食物，繼而是半流質(zhì)食物，最后水和唾液也不能咽下。成纖維細(xì)胞(Fibroblast)是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分，由胚胎時期的間充質(zhì)細(xì)胞分化而來。成纖維細(xì)胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu)，其細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細(xì)胞功能活動旺盛，細(xì)胞質(zhì)嗜弱堿性，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動，在一定條件下，它可以實現(xiàn)跟纖維細(xì)胞的互相轉(zhuǎn)化；成纖維細(xì)胞對不同程度的細(xì)胞變性、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用。剛分離的成纖維細(xì)胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細(xì)胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起；6h后細(xì)胞基本貼壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團(tuán)；細(xì)胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態(tài)，細(xì)胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細(xì)胞質(zhì)透明，細(xì)胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細(xì)胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀；細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。

方法簡介：

實驗室分離的人食管癌成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

質(zhì)量檢測：

實驗室分離的人食管癌成纖維采用 - 膠原酶混合酶消化后差速貼壁制備而來，細(xì)胞總量約為5×105cells/瓶。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣

傳代特性：可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

原代細(xì)胞培養(yǎng)的具體操作步驟如下：

?組織處理?：將動物組織從機(jī)體中取出，剪碎后用等消化酶處理，使其分散成單個細(xì)胞。

?細(xì)胞計數(shù)?：使用血細(xì)胞計數(shù)器或其他方法對細(xì)胞進(jìn)行計數(shù)，確保細(xì)胞密度適中。

?接種培養(yǎng)?：將細(xì)胞懸液接種到培養(yǎng)瓶中，加入適量的培養(yǎng)基，置于37℃、5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

?換液和傳代?：定期更換培養(yǎng)液，當(dāng)細(xì)胞達(dá)到一定密度時進(jìn)行傳代培養(yǎng)，以維持細(xì)胞的生長狀態(tài)。

公司正在出售的產(chǎn)品：

小鼠紅細(xì)胞生成素(EPO)ELISA 試劑盒 96T/48T

Rat phosphatidylinositol aibody IgG/IgM (PI Ab-IgG/IgMELISA Kit 大鼠0脂酰肌醇抗體IgG/IgM(PI Ab-IgG/IgMELISA試劑盒

humahyroid-stimulatinghormonereceptoraibody,TSHRELISAKit 人促甲狀腺激素受體抗體(TSHR)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Humanai-neuophilaibody,ANAELISA試劑盒人抗中性粒細(xì)胞抗體(ANA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

植物染色質(zhì)免疫沉淀分析(CHIP)試劑盒(包括抗體)10次

humanUlasensitivityThyroxine,u-T4ELISAKit人高敏甲狀腺素(u-T4)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

小鼠γ干擾素誘導(dǎo)蛋白16/p16(IFI16/p16)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1a(SDF-1a/CXCL12)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(VEGF)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

小鼠血漿α顆粒膜蛋白(GMP-140)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

大鼠連環(huán)蛋白β1(CTNNβ1)ELISA試劑盒 ，英文名： CTNNβ1 ELISA Kit

Mouse inhibin B (INH-B) ELISA Kit 小鼠抑制素B(INH-B)ELISA試劑盒

RathighsensitivityC-ReactiveProtein,hs-CRPELISAKit 大鼠超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforGal(HumanAlpha-galactoyl)ELISAKit人α半乳糖基抗體規(guī)格：48T/96T

細(xì)胞胱(cystine)含量比色法定量檢測試劑盒20次

RatProstaglandinF2α,PGF2αELISAKit大鼠前列腺素F2α(PGF2α)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

SERPINB8重組小鼠 SerpinB8 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

BMPR-1A(Bone Morphogenetic protein Receptor-1A 0.5mgBMPR-1A(Bone Morphogenetic protein Receptor-1A) 骨成型蛋白受體1A抗原

NRG1重組人 NRG1-beta 1 蛋白 (ECD, Fc 標(biāo)簽) Protein

F13B Protein Human 重組人 Coagulation Factor XIII B chain / F13B 蛋白 (His 標(biāo)簽)

CD276 Protein Rat 重組大鼠 B7-H3 / CD276 蛋白 (His 標(biāo)簽)

人食管癌成纖維細(xì)胞BMPR-1A(Bone Morphogenetic protein Receptor-1A 0.5mgBMPR-1A(Bone Morphogenetic protein Receptor-1A) 骨成型蛋白受體1A抗原

F13B Protein Human 重組人 Coagulation Factor XIII B chain / F13B 蛋白 (His 標(biāo)簽)

SERPINB8重組小鼠 SerpinB8 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

CD276 Protein Rat 重組大鼠 B7-H3 / CD276 蛋白 (His 標(biāo)簽)

NRG1重組人 NRG1-beta 1 蛋白 (ECD, Fc 標(biāo)簽) Protein

原代細(xì)胞的4種培養(yǎng)方法：

　　① 組織塊培養(yǎng)法

　　組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中，瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長。

　　② 消化培養(yǎng)法

　?、?懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法

　　對于懸浮生長的細(xì)胞，如白血病細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無需消化，可采用低速離心分離，直接培養(yǎng)，或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。

　?、芷鞴倥囵B(yǎng)

　　器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后，不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng)，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性，可用于重點觀察細(xì)胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響，以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。