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人胃癌成纖維細(xì)胞

商品屬性：

細(xì)胞簡(jiǎn)介：

人胃癌成纖維分離自患有胃癌病人的胃癌組織；胃癌(gastric carcinoma)是起源于胃黏膜上皮的惡性腫瘤，在我國(guó)各種惡性腫瘤中發(fā)病率居，胃癌可發(fā)生于胃的任何部位，其中半數(shù)以上發(fā)生于胃竇部，胃大彎、胃小彎及前后壁均可受累，絕大多數(shù)胃癌屬于腺癌。在胃癌侵襲和轉(zhuǎn)移的過(guò)程中，涉及諸多復(fù)雜的過(guò)程，如細(xì)胞外基質(zhì)的硬化和降解、新生血管的形成等，而這些過(guò)程會(huì)直接或間接的引起腫瘤微環(huán)境(Tumor mircoenvironment)的改變。腫瘤微環(huán)境即腫瘤細(xì)胞生存的外部環(huán)境，由不同種類的非腫瘤性的細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)(Extracellular matrix，ECM)構(gòu)成，包括纖維細(xì)胞，免疫細(xì)胞，內(nèi)皮細(xì)胞，間充質(zhì)干細(xì)胞等，腫瘤細(xì)胞通過(guò)調(diào)控這些間質(zhì)細(xì)胞，創(chuàng)造出有利于自身侵襲轉(zhuǎn)移的條件，從而使得腫瘤得到進(jìn)展。越來(lái)越多的證據(jù)表明，腫瘤微環(huán)境的改變?cè)谀[瘤進(jìn)展中扮演著重要的角色。在腫瘤微環(huán)境中，研究最多也是最主要的間質(zhì)細(xì)胞是腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞(cancer-associated fibroblasts, CAFs)。CAFs 主要由腫瘤周邊的正常成纖維細(xì)胞和成纖維細(xì)胞樣細(xì)胞演化而來(lái)。胃癌成纖維細(xì)胞多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu)，其細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯。剛分離的胃癌成纖維細(xì)胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細(xì)胞貼壁，其中部分開(kāi)始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起；6h后細(xì)胞基本貼壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長(zhǎng)，不聚集成團(tuán)；細(xì)胞生長(zhǎng)迅速，5-7天即呈融合狀態(tài)，細(xì)胞排列緊密，有的交叉重疊生長(zhǎng)，平坦、胞體較大，細(xì)胞質(zhì)透明，細(xì)胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細(xì)胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀；細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。

方法簡(jiǎn)介：

實(shí)驗(yàn)室分離的人胃癌成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

質(zhì)量檢測(cè)：

實(shí)驗(yàn)室分離的人胃癌成纖維采用混合膠原酶消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×105cells/瓶。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基：含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣

傳代特性：可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

原代細(xì)胞VS細(xì)胞系：

用酶或機(jī)械方法直接從人或動(dòng)物組織中分離出來(lái)的細(xì)胞。嚴(yán)格來(lái)說(shuō)，從機(jī)體分離出來(lái)到傳代之前的細(xì)胞稱為原代細(xì)胞，絕大部分的原代細(xì)胞在體外可以分裂10-15次(這與細(xì)胞的端粒長(zhǎng)短有關(guān))，再加上取材，成本等因素，通常會(huì)把培養(yǎng)的第一代到第十代以內(nèi)的細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)胞。

原代細(xì)胞一般傳至10代左右，大部分細(xì)胞衰老死亡，但是有極少數(shù)的細(xì)胞能夠度過(guò)“危機(jī)"而繼續(xù)傳下去，存活的細(xì)胞一般能夠傳到40-50代，叫細(xì)胞株。當(dāng)50代以后又會(huì)出現(xiàn)“危機(jī)"，這時(shí)有部分細(xì)胞的遺傳物質(zhì)發(fā)生了改變且?guī)в邪┳兊奶攸c(diǎn)，從而可能無(wú)限制地傳代下去，稱為細(xì)胞系。

也有認(rèn)為細(xì)胞系指原代細(xì)胞培養(yǎng)物經(jīng)傳代成功后所繁殖的細(xì)胞群體。也指可長(zhǎng)期連續(xù)傳代的培養(yǎng)細(xì)胞。由此便引申出了后來(lái)的有限細(xì)胞系、無(wú)限細(xì)胞系，因此，細(xì)胞系狹義的是指可連續(xù)傳代的細(xì)胞，廣義是指可傳代的細(xì)胞。而細(xì)胞株是通過(guò)選擇法或克隆形成法，從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中獲得具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志物的單一細(xì)胞稱為細(xì)胞株。

細(xì)胞系具有容易培養(yǎng)、種類多、價(jià)格便宜、無(wú)限傳代等優(yōu)點(diǎn)，也非常容易在培養(yǎng)、凍存中發(fā)生錯(cuò)誤鑒定及交叉污染的問(wèn)題。

原代細(xì)胞培養(yǎng)的具體步驟：

1、準(zhǔn)備：取各種已消毒的培養(yǎng)用品置于凈化臺(tái)面，紫外線消毒20分鐘。開(kāi)始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。

2、布局：點(diǎn)燃酒精燈，安裝吸管帽。

3、處理組織：把組織塊置于燒杯中，用Hanks液漂洗2-3次，去除血污；如懷疑組織可能污染，可先置于含有青的混合液中30-60分鐘。

5、消化：或用恒溫水浴，或置于37℃溫箱消化均可，消化中每隔20分鐘應(yīng)搖動(dòng)一次，如用電磁恒溫?cái)嚢杵飨?。消化時(shí)間依組織塊的大小和組織的硬度而定。

6、分離：在消化過(guò)程中見(jiàn)消化液發(fā)混濁時(shí)，可用吸管吸出少許消化液在鏡下觀察，如組織已分散成細(xì)胞團(tuán)或單個(gè)細(xì)胞，立即終止消化，隨即通過(guò)適宜不銹鋼篩，濾掉尚未充分消化開(kāi)的組織塊。低速（500-1000轉(zhuǎn)/分）離心消化液5分鐘，吸出上清，加入適量含有血清的培養(yǎng)液。

7、計(jì)數(shù)：用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，如細(xì)胞懸液細(xì)胞密度過(guò)大，再補(bǔ)加培養(yǎng)液調(diào)整后，分裝入培養(yǎng)瓶中。對(duì)大多數(shù)細(xì)胞來(lái)說(shuō)，pH要求在7.2-7.4范圍，培養(yǎng)液呈微紅色，如顏色偏黃，說(shuō)明液體變酸，可用NaHCO3調(diào)整。

8、培養(yǎng)：置于37℃溫箱培養(yǎng)，如用CO2溫箱培養(yǎng)，瓶口需用紗布棉塞或螺旋帽堵塞，紗布塞易生霉菌，每次換液時(shí)需要換新塞。

公司正在銷售的產(chǎn)品：

小鼠壞死因子可溶性受體Ⅱ(TNFsR-Ⅱ)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human ai cardiolipin aibody IgM (ACA-IgM) ELISA Kit 人抗心0脂抗體IgM(ACA-IgM)ELISA試劑盒

HumanE3/ubiquitin-proteinligase,E3/UBPLELISAKit 人泛素連接酶(E3/UBPL)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforACA(Humanadrenalcoexaibody)ELISAKit人腎上腺皮質(zhì)抗體規(guī)格：48T/96T

一步法熒光定量PCR反應(yīng)液20次

MouseomeinELISAKit小鼠網(wǎng)膜素(omein)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

小鼠癌胚抗原elisa試劑盒   小鼠癌胚抗原試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠癌胚抗原試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠癌胚抗原試劑盒、小鼠癌胚抗原elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

超氧化物歧化酶測(cè)elisa試劑盒   超氧化物歧化酶測(cè)試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   超氧化物歧化酶測(cè)試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：超氧化物歧化酶測(cè)試劑盒、超氧化物歧化酶測(cè)elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

紅細(xì)胞膜蛋白elisa試劑盒   紅細(xì)胞膜蛋白試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   紅細(xì)胞膜蛋白試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：紅細(xì)胞膜蛋白試劑盒、紅細(xì)胞膜蛋白試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

小鼠16α羥基雌elisa試劑盒   小鼠16α羥基雌試劑盒   規(guī)格型號(hào)：96T/48T   小鼠16α羥基雌試劑盒，規(guī)格型號(hào)：96T/48T，來(lái)源：elisa試劑盒（進(jìn)口分裝），產(chǎn)品別名：小鼠16α羥基雌試劑盒、小鼠16α羥基雌elisa試劑盒   保存條件：2-8℃   保質(zhì)期：6個(gè)月。

大鼠卵0脂脂酰轉(zhuǎn)移酶(LCAT)ELISA試劑盒 ，英文名： LCAT ELISA Kit

Mouse insulin like growth factor binding protein 3 (IGFBP-3) ELISA Kit 小鼠胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白3(IGFBP-3)ELISA試劑盒

Rat50%complemehemolysis,CH50ELISAKit 大鼠血清總補(bǔ)體(CH50)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforGDNFELISAKit大鼠膠質(zhì)細(xì)胞系來(lái)源的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子規(guī)格：48T/96T

細(xì)胞高密度脂蛋白(HDL-Cholesterol)酶連續(xù)循環(huán)比色法定量檢測(cè)試劑盒20次

RatSerumamyloidA,SAAELISAKit大鼠血清淀粉樣蛋白A(SAA)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

EDA2R重組大鼠 XEDAR / EDA2R 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

GATA-3(GATA binding factor 3 0.5mgGATA-3(GATA binding factor 3) GATA結(jié)合蛋白3抗原

CD300A重組人 CD300A / CMRF-35H / IGSF12 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

ERP27 Protein Human 重組人 ERP27 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

MMP8 Protein Mouse 重組小鼠 MMP-8 / CLG1 蛋白

人胃癌成纖維細(xì)胞GATA-3(GATA binding factor 3 0.5mgGATA-3(GATA binding factor 3) GATA結(jié)合蛋白3抗原

ERP27 Protein Human 重組人 ERP27 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

EDA2R重組大鼠 XEDAR / EDA2R 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

MMP8 Protein Mouse 重組小鼠 MMP-8 / CLG1 蛋白

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